[发明专利]双特异性抗原结合蛋白

说明书

本发明涉及双特异性抗原结合蛋白、其生成方法、含有所述抗体的药物组合物、及其用途。

发明背景

经工程化改造的蛋白质，诸如能够结合两种或更多种抗原的双或多特异性抗体是本领域中已知的。可以使用细胞融合、化学缀合、或重组DNA技术来生成此类多特异性结合蛋白。

最近已经开发出极其多种重组多特异性抗体形式，例如通过融合例如IgG抗体形式和单链域得到的四价双特异性抗体(参见例如Coloma，M.J.等，Nature Biotech.15(1997)159-163；WO 2001/077342；及Morrison，S.L.，Nature Biotech.25(2007)1233-1234)。

还有，已经开发出能够结合两种或更多种抗原的数种其它不再保留抗体核心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)的新形式，诸如双抗体、三抗体或四抗体、微型抗体、数种单链形式(scFv、双-scFv)(Holliger，P.等，Nature Biotech 23(2005)1126-1136；Fischer，N.和Léger，O.，Pathobiology 74(2007)3-14；Shen，J.等，J.Immunol.Methods 318(2007)65-74；Wu，C.等，NatureBiotech 25(2007)1290-1297)。

所有此类形式使用接头来融合抗体核心(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)与别的结合蛋白(例如scFv)或者融合例如两个Fab片段或scFv(Fischer，N.和Léger，O.，Pathobiology 74(2007)3-14)。虽然接头在工程化改造双特异性抗体方面具有优点是明显的，但是它们还可以引起治疗背景中的问题。实际上，这些外来肽可以引发针对接头自身或蛋白质与接头间的接合的免疫应答。此外，这些肽的柔性性质使它们更易于蛋白水解切割，这潜在地导致较差的抗体稳定性、聚集和升高的免疫原性。另外，可能想要保留效应器功能，诸如例如补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，其是经由Fc部分通过维持与天然存在的抗体的高度相似性来介导的。

如此，理想地，应当旨在开发在一般结构上与天然存在的抗体(如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)非常相似的双特异性抗体，其与人序列具有最小的偏离。

在一种方法中，已经使用四源杂交瘤(quadroma)技术(参见Milstein，C.和Cuello，A.C.，Nature 305(1983)537-540)来生成与天然抗体非常类似的双特异性抗体，所述四源杂交瘤技术基于两种不同的表达具有期望的双特异性抗体特异性的鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞系的体细胞融合。由于所得的杂合-杂交瘤(或四源杂交瘤)细胞系内的两种不同抗体重链和轻链的随机配对，生成多达10种不同抗体种类，其中仅一种是期望的功能性双特异性抗体。由于错配副产物的存在和显著降低的生产产量，意味着需要复杂的纯化规程(参见例如Morrison，S.L.，Nature Biotech.25(2007)1233-1234)。一般地，若使用重组表达技术，则仍存在相同的错配副产物问题。

一种避开错配副产物问题的方法(其称为“隆突-入-穴(knob-into-hole)”)旨在通过将突变引入CH3域中来修饰接触界面，从而迫使两种不同抗体重链配对。在一条链上，用具有较短侧链的氨基酸替换体积大的氨基酸以创建“穴”。相反地，将具有较大侧链的氨基酸引入另一种CH3域中，以创建“隆突”。通过共表达这两种重链(和两条相同的轻链，其必须适合于这两种重链)，观察到异二聚体形成(“隆突-穴”)相对于同二聚体形成(“穴-穴”或“隆突-隆突”)的高产量(Ridgway，J.B.，Protein Eng.9(1996)617-621；及WO96/027011)。可以通过使用噬菌体展示法来重建两种CH3域的相互作用表面并引入二硫桥以稳定化异二聚体来进一步提高异二聚体的百分比(MerchantA.M等，Nature Biotech 16(1998)677-681；Atwell，S.等，J.Mol.Biol.270(1997)26-35)。关于隆突-入-穴技术的新方法记载于例如EP 1870459A1。虽然此形式似乎非常有吸引力，但是目前不可获得描述通向临床的进展的数据。此策略的一种重要的约束是两种亲本抗体的轻链必须相同，以阻止错配和无活性分子的形成。如此，此技术不适合于容易地开发自针对第一和第二抗原的两种抗体起始的针对两种抗原的重组双特异性抗体，因为这些抗体的重链和/或相同的轻链必须是优化的。