[发明专利]岩藻糖基化缺陷型细胞

权利要求书

1.能够使糖蛋白岩藻糖基化的细胞，其中所述细胞包含修饰的GDP-4-酮-6-脱氧-甘露糖-3，5-表异构酶-4-还原酶(FX)基因，该基因具有编码与SEQ ID NO：1至少90％同一并且在289位包含丝氨酸的FX蛋白的修饰，并且其中当所述细胞在不存在外部岩藻糖源的情况下在大约37℃的温度生长时，不超过大约10％的糖蛋白被岩藻糖基化。

2.权利要求1的细胞，其中所述FX基因进一步包含编码在特定位置具有选自下列的氨基酸的FX蛋白的修饰：位置79处的丝氨酸、位置90处的赖氨酸、位置136处的亮氨酸、位置211处的精氨酸、及其组合。

3.权利要求1的细胞，其中所述FX蛋白与SEQ ID NO：1至少95％同一，并且在位置289处包含丝氨酸。

4.权利要求1的细胞，其中所述细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

5.权利要求1的方法，其中所述FX蛋白是仓鼠、小鼠、大鼠、猴子或人的FX蛋白。

6.权利要求1的细胞，其中所述细胞表达包含免疫球蛋白CH2区和免疫球蛋白CH3区的糖蛋白。

7.权利要求6的细胞，其中所述糖蛋白是抗体。

8.权利要求6的细胞，其中当所述细胞在不存在外部岩藻糖源的情况下在大约37℃的温度生长时，不超过大约6％的糖蛋白被岩藻糖基化。

9.权利要求8的细胞，其中当所述细胞在不存在外部岩藻糖源的情况下在大约37℃的温度生长时，不超过大约2％的糖蛋白被岩藻糖基化。

10.权利要求1的细胞，其中当所述细胞在不存在外部岩藻糖源的情况下在大约34℃的温度生长时，所述细胞使至少70％的糖蛋白岩藻糖基化。

11.权利要求1的细胞，其中当所述细胞在不存在外部岩藻糖源的情况下在大约34℃的温度生长时，所述细胞使至少90％的糖蛋白岩藻糖基化。

12.权利要求1的细胞，其中当所述细胞在存在外部岩藻糖源的情况下在大约37℃的温度生长时，所述细胞使至少70％的糖蛋白岩藻糖基化。

13.权利要求1的细胞，其中当所述细胞在存在外部岩藻糖源的情况下在大约37℃的温度生长时，所述细胞使至少90％的糖蛋白岩藻糖基化。

14.编码FX蛋白的分离的核苷酸序列，其中所述FX蛋白在位置289处包含丝氨酸。

15.权利要求14的分离的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列编码的FX蛋白还包含：位置79处的丝氨酸，或位置90处的赖氨酸，或位置136处的亮氨酸，或位置211处的精氨酸，或其组合。

16.权利要求14的分离的核苷酸序列，其编码与SEQ ID NO：1至少95％同一的FX蛋白。

17.权利要求1的细胞，还包括编码免疫球蛋白基因的核苷酸序列。

18.制备具有减少的岩藻糖基化的糖蛋白的方法，包括：

在大约37℃的温度，在不存在外部岩藻糖源的情况下，培养哺乳动物细胞，所述细胞包含FX基因，所述FX基因编码FX蛋白，所述FX蛋白在位置289处具有丝氨酸，其中所述细胞表达包含免疫球蛋白CH2区和免疫球蛋白CH3区的糖蛋白；和

从培养物中分离糖蛋白。

19.权利要求18的方法，其中所述FX基因编码在特定位置具有选自下列的氨基酸的FX蛋白：位置79处的丝氨酸、位置90处的赖氨酸、位置136处的亮氨酸、位置211处的精氨酸、及其组合。

20.权利要求18的方法，其中所述糖蛋白是抗体。