[发明专利]用于分析能量代谢中极性代谢物的方法

权利要求书

1.用于分析极性代谢物的方法，其包括：

i)在允许直接破坏生物样品所包含的细胞的条件下，用包含相分离剂和挥发性中性铵盐的提取缓冲液提取生物样品，

ii)通过色谱法分离步骤i)中所获得的提取物所包含的极性代谢物，和

iii)分析步骤ii)中所获得的分离的极性代谢物。

2.权利要求1的方法，其中所述的相分离剂包含二氯甲烷。

3.权利要求1或2的方法，其中所述的挥发性铵盐是乙酸铵、甲酸铵或碳酸氢铵。

4.权利要求1至3中任意一项的方法，其中所述的挥发性中性铵盐的浓度至少为0.5M。

5.权利要求1至4中任意一项的方法，其中步骤i)中所述的提取生物样品在-20至-80℃的提取温度进行。

6.权利要求1至5中任意一项的方法，其中在步骤ii)之前通过下面的步骤处理所述提取物：

a)将水相旋转离心，

b)将步骤a)中所获得的上清液冷冻干燥，和

c)将步骤b)中所获得的冷冻干燥物溶解在包含离子对生成剂的分析缓冲液中。

7.权利要求1至6中任意一项的方法，其中所述的离子对生成剂是三丁基铵阳离子、三乙基铵阳离子、三丙基铵阳离子或正己基铵阳离子。

8.权利要求1至7中任意一项的方法，其中所述的色谱法是UPLC或HPLC。

9.权利要求1至8中任意一项的方法，其中所述的分析步骤iii)中所获得的分离的极性代谢物包括质谱法。

10.权利要求9的方法，其中质谱法是ESI-MS/MS。

11.权利要求1至10中任意一项的方法，其中所述的生物样品是细胞悬浮液。

12.用于淬灭包含细胞物质的生物样品的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供包含由包含丙二醇或乙二醇的淬灭溶液组成的下层相、由惰性相分离剂组成的中间相、和由生物样品组成的上层相的离心瓶，其中下层相比中间相具有更高的密度，且中间相比上层相具有更高的密度，和

b)使该瓶离心以使生物样品所包含细胞物质从上层相转移至下层相。

13.权利要求12的方法，其中所述的下层相具有-20至-80℃的温度。

14.权利要求12或13的方法，其中在离心后从下层相中去除上清液并将同位素标记的标准物质加入到下层相。

15.权利要求11的方法，其中，在步骤i)之前，如权利要求12至14中任意一项所定义的那样将所述细胞悬浮液淬灭。

16.权利要求1至10中任意一项的方法，其中所述的生物样品是生长在膜上的贴壁细胞的培养物。

17.权利要求16的方法，其中，在步骤i)之前，通过直接将膜转移至具有-20至-80℃温度的如权利要求1至4中任意一项所定义的提取缓冲液中而将生长在所述膜上的贴壁细胞的培养物淬灭。

18.权利要求16的方法，其中，在步骤i)之前，通过直接将膜转移至液氮中而将生长在所述膜上的贴壁细胞的培养物淬灭。

19.权利要求1至10中任意一项的方法，其中所述的生物样品是组织样品。

20.权利要求18的方法，其中，在步骤i)之前，通过直接将组织冷冻至-20至-80℃的温度或通过应用液氮而将所述组织淬灭。