[发明专利]用于分析能量代谢中极性代谢物的方法

说明书

本发明涉及极性代谢物的分析并提供了用于分析极性代谢物的方法，其包括在允许直接破坏生物样品所包含的细胞的条件下用包含相分离剂和挥发性中性铵盐的提取缓冲液提取生物样品，通过色谱法分离提取物所包含的极性代谢物，并分析所分离的极性代谢物。此外，考虑了用于淬灭包含细胞物质的生物样品的方法。

极性代谢物诸如羧化代谢物或磷酸化代谢物占细胞的代谢组物的高达90％。相应地，代谢组学，即代谢组物的系统和比较分析，在极大程度上涉及极性代谢物的分析。

目前提供的用于代谢组学的分析技术主要是基于以液相色谱或气相色谱为基础的质谱或以液相色谱或气相色谱为基础的NMR(核磁共振)谱。

在代谢组学中气相色谱的应用的缺点是必须将代谢物转换成气相而不未破坏分子。应用衍生化以改善所述的转换。然而，衍生化也具有一些缺点，因为人工衍生化能产生有时几乎与真实代谢物无法区分的代谢物。

液相色谱既不需要转换成气相也不需要衍生化。然而，对于极性代谢物的分离是不太有效的。此外，由于生物样品中过多的蛋白质类、肽类和无机盐的存在，对于极性代谢物的分离效能通常被显著地降低。

因此，期望的是把气相色谱的精确分离特性与能被应用于液相色谱的温和的条件结合。这样，将会避免上述的缺点。

因此，虽然还没有用于代谢物的有效的提取和分析的方法，但却是迫切需要的。

本发明涉及用于分析极性代谢物的方法包括：

i)在允许直接破坏生物样品所包含的细胞的条件下，用包含相分离剂和挥发性中性铵盐的提取缓冲液提取生物样品，

ii)通过色谱法分离步骤i)中所获得的提取物所包含的极性代谢物，和

iii)分析步骤ii)中所获得的分离的极性代谢物。

本文所应用的术语“生物样品”是指包含来自所有生物来源的生物物质的样品。应当理解的是生物物质应包括代谢物。生物样品所包含的优选的物质是细胞物质，诸如细胞或细胞碎片。因此，优选地，生物样品包含悬浮细胞、贴壁细胞或组织或它们的任何碎片。优选的生物样品包含来自临床样品的生物物质，包括体液样品，优选血液、血浆、血清、淋巴液、汗液、唾液、泪液、精液、阴道液、粪便、尿液或脑脊液，或由例如：通过活组织检查从细胞、组织或器官所获得的样品。还优选地，生物样品代表有机体的各种状况的一种，例如：它可是源自健康的或患病的有机体，用药物治疗或未治疗的有机体等。还包括包含微生物诸如细菌或真菌或者植物、植物部分(诸如叶、茎、根或花)或植物种子的生物样品。