[发明专利]真菌丝氨酸蛋白酶及其用途

权利要求书

1.一种真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶具有丝氨酸蛋白酶活性，并且包含SEQ ID NO：18限定的成熟Fa_RF7182酶的氨基酸序列或与SEQ ID NO：18限定的成熟Fa_RF7182酶的氨基酸序列有至少81％同一性的氨基酸序列。

2.权利要求1的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶可获自锐顶镰孢菌。

3.权利要求1或2的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶具有丝氨酸蛋白酶活性，并且包含氨基酸序列SEQ ID NO：18。

4.权利要求1-3中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶的成熟形式的分子量介于20kDa和35kDa之间。

5.权利要求1-4中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在pH 9下用15分钟反应时间和酪蛋白作为底物的最适温度为30℃-70℃。

6.权利要求1-5中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在50℃下用15分钟反应时间和酪蛋白作为底物的最适pH为至少pH 6-pH 12的pH范围。

7.权利要求1-6中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在洗涤剂存在下在10℃和60℃之间能够降解和去除蛋白质污渍。

8.权利要求1-7中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由分离的多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列在严格条件下与质粒pALK2530中所包含的多核苷酸序列杂交，所述质粒包含核苷酸序列SEQ ID NO：12、保藏于保藏号DSM 22208的大肠杆菌RF7803中。

9.权利要求1-8中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由分离的多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列编码包含SEQ ID NO：18限定的成熟Fa_RF7182酶的氨基酸序列或与SEQ ID NO：18限定的成熟Fa_RF7182的氨基酸序列有至少81％同一性的氨基酸序列的多肽。

10.权利要求1-9中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由分离的核酸分子编码，所述核酸分子编码包含SEQ ID NO：18中表征的氨基酸序列的多肽。

11.权利要求1-10中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由包含核苷酸序列SEQ ID NO：17的分离核酸分子编码。

12.权利要求1-11中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由pALK2531中所包含的多核苷酸序列编码，所述pALK2531保藏于保藏号DSM 22209的大肠杆菌RF7879中。

13.权利要求1-12中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由重组表达载体产生，所述载体包含与能够指导丝氨酸蛋白酶编码基因在合适的宿主中表达的调节序列有效连接的编码权利要求1-12中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶的核酸分子。

14.权利要求1-13中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在异源宿主中产生。

15.权利要求1-14中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在微生物宿主中产生。

16.权利要求1-15中任一项的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在以下宿主中产生：木霉属、曲霉属、镰孢属、腐质霉属、金孢子菌属、脉孢菌属、根霉属、青霉属和被孢霉属。

17.权利要求16的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在木霉属或曲霉属中产生。

18.权利要求17的真菌丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在里氏木霉中产生。