[发明专利]真菌丝氨酸蛋白酶及其用途

说明书

发明领域

本发明涉及可用于各种应用，特别是洗衣洗涤剂和餐具洗涤剂的真菌丝氨酸蛋白酶。本发明涉及编码所述酶的核酸分子、重组载体、用于产生所述酶的宿主细胞、包含所述酶的酶组合物以及用于制备这类组合物的方法。本发明还涉及所述酶或包含所述酶的组合物的各种用途。

背景

微生物蛋白酶是最重要的水解酶之一，并应用于各个工业部门，例如洗涤剂、食品、皮革、制药、诊断学、废物管理和银回收。微生物的胞外蛋白酶占全球工业用酶总销售的主要部分，超过三分之一(Cherry和Fidantsef，2003)。大约90％的商用蛋白酶是洗涤剂酶(Gupta等，2002)。主要是中性和碱性的大多数商用蛋白酶由属于芽孢杆菌属(Bacillus)的生物产生。

枯草杆菌蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶或由芽孢杆菌属菌种产生的枯草杆菌蛋白酶构成工业用蛋白酶的最大亚类。这些酶作为洗涤剂的蛋白降低组分或添加剂在商业上具有重要性。目前在使用中的商用洗涤剂制品包含来源于芽孢杆菌属菌种的天然存在的碱性丝氨酸蛋白酶或者是来自芽孢杆菌属菌种的重组蛋白酶制备物(Maurer，2004)。通过位点定向诱变和/或随机诱变，已开发出催化效率得到改进和/或对温度、氧化剂和变化的洗涤条件具有更好稳定性的天然酶的变体。商用蛋白酶的实例为例如枯草杆菌蛋白酶Carlsberg(AlcalaseNovozymes，DK)、枯草杆菌蛋白酶309(SavinaseNovozymes，DK)、枯草杆菌蛋白酶147(EsperaseNovozymes，DK)、Purafect(Genencor Inc.，USA)、Kannase(Novozymes，DK)、PurafectOx，Properase(Genencor Inc.，USA)及BLAP S和X系列(Henkel，DE)。

也已从包括酵母和丝状真菌在内的真核生物中分离出若干碱性丝氨酸蛋白酶(EC 3.4.21)和编码这些酶的基因。美国专利号3,652,399和EP 519229(Takeda Chemical Industries，Ltd.，JP)公开了来自镰孢属(Fusarium)(无性态，有性型)或赤霉属(Gibberella)(有性态，无性型)、特别是来自镰孢属菌种S-19-5(ATCC 20192，IFO 8884)、亚麻尖镰孢(F.oxysporum f.sp.Lini)(IFO 5880)或小麦赤霉(G.saubinetti)(ATCC 20193，IFO6608)的碱性蛋白酶用于洗涤剂和其它清洁剂组合物的配制中。美国专利号5,288,627(NovoNordisk A/S，DK)公开了包含分离的丝氨酸蛋白酶的内切蛋白酶制备物，所述丝氨酸蛋白酶显示与来源于尖镰孢(F.oxysporum)DSM 2672的蛋白酶的免疫化学同一性。WO 88/03946和WO 89/04361(Novo Industri A/S，DK)公开了包含蛋白酶和脂肪酶的加酶洗涤剂添加剂和洗涤剂组合物，其中真菌蛋白酶来源于镰孢属，特别是尖镰孢或腐皮镰孢(F.solani)。WO89/06270中公开了包含只对一个或两个特定氨基酸附近的肽键具有特异性的蛋白酶的洗涤剂添加剂。WO1994025583(NovoNordisk A/S，DK)公开了可来源于镰孢属菌种(特别是尖镰孢(DSM 2672)菌株)的有活性的胰蛋白酶样蛋白酶，和编码所述酶的DNA序列。来源于镰孢属菌种BLB(FERM BP-10493)的新的蛋白酶的氨基酸序列公开于WO 2006101140(SODX Co.Ltd，Nakamura)。同样，有研究报道了来自真菌菌种(例如念球属(Tritirachium)和耳霉属(Conidiobolus))的碱性蛋白酶(有关综述见Anwar和Saleemuddin，1998)。