[发明专利]聚乙二醇化的L-天冬酰胺酶

说明书

发明背景

发明领域

本发明涉及具有实质性的L-天冬酰胺氨基水解酶活性的蛋白质与聚乙二醇的缀合物，特别是其中所述聚乙二醇具有低于或等于约5000Da的分子量，特别涉及其中所述蛋白质是来自欧文氏菌(Erwinia)的L-天冬酰胺酶的缀合物，以及其在治疗中的用途。

背景技术

具有L-天冬酰胺氨基水解酶活性的蛋白(通常被称作L-天冬酰胺酶)已经多年被成功地用于治疗儿童中的急性淋巴细胞白血病(ALL)。ALL是最常见的儿童恶性肿瘤(Avramis and Panosyan，Clin.Pharmacokinet.(2005)44：367-393)。

L-天冬酰胺酶还被用于治疗何杰金氏病，急性骨髓白血病，急性骨髓单核细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，淋巴肉瘤，网状细胞肉瘤和黑素肉瘤(Kotzia and Labrou，J.Biotechnol.127(2007)657-669)。L-天冬酰胺酶的抗肿瘤活性被相信是由于某些恶性细胞不能合成L-天冬酰胺或降低了合成L-天冬酰胺的能力(Kotzia and Labrou，J.Biotechnol.127(2007)657-669)。这些恶性细胞依赖于L-天冬酰胺的细胞外供给。然而，L-天冬酰胺酶催化L-天冬酰胺水解为天冬胺酸和氨，从而耗尽循环的L-天冬酰胺库并杀死肿瘤细胞，所述肿瘤细胞在没有L-天冬酰胺时不能进行蛋白质合成(Kotzia and Labrou，J.Biotechnol.127(2007)657-669)。

来自大肠杆菌的L-天冬酰胺酶是用于ALL治疗的第一种酶药物并且在美国已作为上市，或者在欧洲作为和L-天冬酰胺酶上市。也从其它的微生物中分离了L-天冬酰胺酶，例如，来自菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)的L-天冬酰胺酶蛋白，被命名为克立他酶(crisantaspase)，其作为上市(Wriston Jr.，J.C.(1985)″L-asparaGlnase″Meth.Enzymol.113，608-618；Goward，C.R.等人.(1992)″Rapid large scale preparation of recombinant Erwinia chrysanthemi L-asparaGlnase″，Bioseparation 2，335-341)。还鉴别了来自其它欧文氏菌菌种的L-天冬酰胺酶，包括例如菊欧文氏菌3937(Genbank登录号AAS67028)，菊欧文氏菌NCPPB 1125(Genbank登录号CAA31239)，胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)(Genbank登录号AAP92666)和胡萝卜软腐欧文氏菌马铃薯黑胫亚种(Erwinia carotovora subsp.Astroseptica)(Genbank登录号AAS67027)。这些菊欧文氏菌L-天冬酰胺酶彼此间具有大约91％-98％的氨基酸序列同一性，而胡萝卜软腐欧文氏菌L-天冬酰胺酶与菊欧文氏菌L-天冬酰胺酶具有大约75％-77％的氨基酸序列同一性(Kotzia and Labrou，J.Biotechnol.127(2007)657-669)。

细菌来源的L-天冬酰胺酶具有高免疫原和抗原潜力并且经常引起不良反应，所述不良反应的范围从轻度过敏反应到敏化患者中的过敏性休克(Wang，B.等人.(2003)″Evaluation of immunologic cross reaction of anti-asparaGlnase antibodies in acute lymphoblastic leukemia(ALL and lymphoma patients)，Leukemia 17，1583-1588)。大肠杆菌L-天冬酰胺酶是特别有免疫原性的，据报道在i.v.或i.m.施用之后，存在抗大肠杆菌L-天冬酰胺酶的抗天冬酰胺酶抗体：在成年人中高达78％；在儿童中为70％(Wang，B.等人.(2003)Leukemia 17，1583-1588)。