[发明专利]纯化蛋白复合物的方法

权利要求书

1.一种用于纯化应激蛋白和多肽之间形成的复合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供源混合物，所述源混合物包括由与多肽复合的应激蛋白形成的至少一种靶应激蛋白复合物，

(ii)确定待从所述源混合物纯化的所述至少一种靶应激蛋白复合物的等电点(pI)；

(iii)从包括所鉴定的应激蛋白复合物的所述源混合物制备澄清的细胞裂解物；

(iv)使步骤(iii)的所述澄清的细胞裂解物经受利用离子交换的纯化，其中在离子交换过程中所述澄清的细胞裂解物被包括至少一种二价阳离子的第一缓冲液缓冲至所述靶应激蛋白复合物的pI的2个单位内的pH，并且其中使用提供盐梯度的第二缓冲液来洗脱靶应激蛋白复合物的混合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中被洗脱的靶应激蛋白复合物以制备物提供，所述制备物包括不同热休克蛋白种类的多个应激蛋白。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中步骤(iv)的第一缓冲液还包括二磷酸腺苷。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述二磷酸腺苷以从0.1mM至100mM的浓度来提供，并且其中所述二价阳离子以0.1mM至100mM的浓度来提供。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种二价阳离子是镁盐和/或锰盐。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一缓冲液缺少三磷酸腺苷(ATP)、ATP酶、和/或钾或钾盐中的至少一种。

7.如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一缓冲液不包括离液剂、表面活性剂、尿素或两性电解质。

8.如权利要求1或2所述的方法，其中所述第二缓冲液是提供盐梯度的洗脱缓冲液。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包括氯化钠。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述氯化钠以50mM至500mM的浓度在所述洗脱缓冲液中被提供。

11.如权利要求8所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH从pH3至pH10。

12.如权利要求8所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH从pH4至pH9。

13.如权利要求8所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH为pH6.8。

14.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换是离子交换色谱。

15.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换是阳离子交换色谱。

16.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换是阴离子交换色谱。

17.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换是混合型色谱。

18.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换利用离子交换膜吸附器来进行，所述离子交换膜吸附器用来将复合蛋白混合物分成碱性级分和酸性级分。

19.如权利要求1或2所述的方法，其中所述离子交换的固相是树脂或膜。

20.如权利要求1或2所述的方法，其中所述应激蛋白复合物被洗脱在包括具有4.5至6.5的pI的复合物的级分中。

21.如权利要求16所述的方法，其中所述阴离子交换色谱在从5.0至9.0的pH下和从0.5mS/cm至5mS/cm的电导率下进行。

22.如权利要求15所述的方法，其中所述阳离子交换色谱在从4.0至9.0的pH下和从0.5mS/cm至15mS/cm的电导率下进行。

23.如权利要求1或2所述的方法，其中所述应激蛋白是热休克蛋白。

24.如权利要求18所述的方法，其中所述复合蛋白混合物包括选自由以下组成的组的一个或多个热休克蛋白：hsp20-30kD、hsp40、hsp60、hsp70、hsp90、hsp100、钙网织蛋白、hsp72、grp94、grp75BiP/grp78、grp75/mt和gp96。