[发明专利]纯化蛋白复合物的方法

说明书

发明领域

本发明涉及纯化蛋白复合物的新颖方法。尤其是，提供了用于纯化包括复合于肽片段的热休克蛋白的蛋白复合物的方法。本发明还延伸到所纯化的蛋白复合物在制备疫苗组合物和使用所述疫苗组合物来预防和治疗传染病和癌症中的用途。

发明背景

接种疫苗被广泛地接受为应对传染病和癌症的全球医疗负担的有利方法。然而，虽然我们对与传染病和癌症有关的分子生物学的认识有显著的进展，但这些领域中的有效疫苗的开发还是有限的。所开发的最有效的疫苗使用活的、减毒的生物，然而，与这种减毒的病原体回复毒力有关的安全风险限制了它们的广泛应用。阻止更有效的疫苗的大规模开发和使用的其它主要阻碍是鉴定将以特定方式引起针对微生物病原体的突变菌株的宽泛的保护性免疫的候选病原体来源的蛋白的有限能力。

一种显示赋予宽泛的、保护性免疫的前景的特定方法是将应激蛋白复合物用作针对传染病和癌症的疫苗(Colaco等人，(2004)Biochem Soc Trans32：626-628和Zeng等人，(2006)Cancer Immunol Immunother 55：329-338)。已广泛记载了热休克蛋白/抗原肽复合物有效作为针对特定的癌症的疫苗(美国专利第5,997,873号；美国专利第5,935,576号，美国专利第5,750,119号，美国专利第5,961,979号和美国专利第5,837,251号)。已显示分离自热休克的BCG细胞的病原体来源的应激蛋白复合物在接种疫苗的宿主中诱导了辅助性T淋巴细胞1(Th1)介导的免疫应答，其在肺结核的小鼠气雾攻击模型中赋予了针对活体攻击(live challenge)的保护性免疫(国际PCT专利申请第WO 01/13944号)。并且，在WO 02/20045、WO 00/10597和WO 01/13943中已显示分离自病原体或病原体感染的细胞的应激蛋白复合物有效作为针对传染病的疫苗中的免疫原性决定物(immunogenicdeterminant)。

热休克蛋白(hsp，HSP)形成广泛遍布植物界和动物界的高度保守的蛋白家族。根据它们的分子量，将主要的热休克蛋白分为6种不同的家族：小型(hsp20-30kDa)；hsp40；hsp60；hsp70；hsp90和hsp100。虽然热休克蛋白最初鉴定于经受热应激(heat stress)的细胞中，已发现它们与许多其它类型的应激有关，比如感染、渗透压应激、细胞因子应激和类似的应激。因此，根据其表达不仅由热应激所导致，也常将热休克蛋白称作应激蛋白(SP)。hsp60家族的成员包括主要伴侣分子GroEL。这些主要伴侣分子与诸如GroES的辅伴侣分子形成多聚体复合物。许多微生物病原体具有形成不同于GroEL的复合物的另外的hsp60家族，且一些hsp60家族成员可能更具免疫原性，比如分枝杆菌的hsp65。hsp70家族的成员包括DnaK，DnaK可与诸如DnaJ的辅伴侣分子形成多聚体复合物。其它主要hsp包括AAAATP酶、Clp蛋白、触发因子、Hip、HtpG、NAC、Clp、GrpE、SecB和前折叠素(prefoldin)。

应激蛋白普遍表达于原核细胞和真核细胞两者中，其中它们在多肽的折叠和解折叠中作为伴侣分子起作用。应激蛋白的另一个作用是陪伴肽从一个细胞区室到另一个细胞区室，以及，在患病细胞的情况下，已知应激蛋白还陪伴病毒肽或肿瘤相关肽至细胞表面。