[发明专利]去除逆转录和扩增反应中的核酸污染的方法

权利要求书

1.从逆转录反应去除核酸污染的方法，其包括使用这样的DNase，该DNase通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

2.从热启动PCR去除核酸污染的方法，其中所述反应是隔离热启动PCR装置和/或涉及热启动DNA聚合酶，所述方法包括使用这样的DNase，该DNase通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中将逆转录反应混合物、热启动PCR装置、热启动PCR混合物或以上的任一种单独的组分在允许消化任何污染的双链DNA的条件下与DNase接触，以及此后将所述反应混合物加热以使所述DNase失活。

4.体外逆转录靶核酸的方法，其中所述方法包括在真正的逆转录反应开始之前，用DNase处理逆转录反应混合物的步骤，所述DNase通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述逆转录反应混合物是完整的混合物，并且在逆转录酶的工作温度加热以使所述DNase失活。

6.如权利要求4或5所述的方法，所述方法包括一个或多个包含以下步骤中的一步或多步的循环：

(i)引物退火

(ii)从引发的多核苷酸的链延伸

(iii)多核苷酸双螺旋解链。

7.如权利要求1和3至6中任一项所述的方法，其中所述逆转录反应之后为核酸扩增反应。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述核酸扩增反应是PCR、LCR、SDA、3SR或LAMP，优选PCR。

9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述逆转录反应和所述扩增反应在一个反应容器中进行。

10.热启动PCR的方法，其中所述反应是隔离热启动PCR装置和/或涉及热启动DNA聚合酶，其中所述方法包括在热启动PCR开始之前，用DNase处理热启动PCR装置/混合物或热启动DNA聚合酶的步骤，所述DNase通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

11.如权利要求8至10中任一项所述的方法，所述方法还包括多个包含以下步骤中的一步或多步的循环：

(i)多核苷酸双螺旋解链

(ii)引物退火

(iii)从引发的多核苷酸的链延伸。

12.DNase，其通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

13.DNase或其酶活性片段，所述DNase具有SEQ ID No.1的序列或具有与SEQ ID No.1至少60％同一性的序列，但是其中SEQ ID No 1的第237位的脯氨酸残基或其它序列中的等同脯氨酸已被修饰、缺失或取代，所述DNase或其酶活性片段通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

14.如权利要求13所述的DNase或其酶活性片段，其中所述DNase具有SEQ ID No.5的序列或具有与SEQ ID No.5至少60％同一性的序列，但是其中SEQ ID No 5的第214位的脯氨酸残基或其它序列中的等同脯氨酸已被修饰、缺失或取代，所述DNase或其酶活性片段通过在约50℃的温度加热5分钟会基本不可逆地失活并且基本对双链DNA是特异的。

15.如权利要求13或14所述的DNase或其酶活性片段，其中所述DNase具有获自来自节肢动物门的物种的DNase的序列，但是其中与SEQ ID No 1的第237位的脯氨酸等同的脯氨酸残基已被修饰、缺失或取代。

16.如权利要求15所述的DNase或其酶活性片段，其中所述DNase具有获自选自以下亚门的物种的DNase的序列：甲壳亚门、六足亚门、螯肢亚门或多足亚门，但是其中与SEQ ID No 1的第237位的脯氨酸等同的脯氨酸残基已被修饰、缺失或取代。