[发明专利]用于定量生物样品中DNA的改良方法无效
| 申请号： | 201080033479.9 | 申请日： | 2010-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN102482697A | 公开（公告）日： | 2012-05-30 |
| 发明（设计）人： | H.哈特 | 申请（专利权）人： | 先正达参股股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;A61K31/70;C07H21/02 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 张文辉 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 定量 生物 样品 dna 改良 方法 | ||
1.一种定量包含玉米核酸的生物样品中事件Bt11DNA的方法，该方法包括：
(a)使所述生物样品与包含由SEQ ID NO：1组成的第一引物和由SEQID NO：2组成的第二引物的第一对引物和包含SEQ ID NO：3的荧光染料标记探针接触，其中在具有来自事件Bt11玉米的基因组DNA的核酸扩增反应中使用时，所述第一对引物产生包含SEQ ID NO：4的第一扩增子并且其中所述第一扩增子用于确定事件Bt11；
(b)使所述生物样品与包含由SEQ ID NO：5组成的第一引物和由SEQID NO：6组成的第二引物的第二对引物和包含SEQ ID NO：7的第二荧光染料标记探针接触，其中在具有玉米基因组DNA的核酸扩增反应中使用时，所述第二对引物产生包含SEQ ID NO：8的第二扩增子，并且其中所述第二扩增子指示玉米adh1基因的存在；
(c)提供能够进行定量实时PCR的核酸扩增反应条件和PCR仪；
(d)使用(a)和(b)的引物和探针进行定量实时PCR，因而产生所述的第一扩增子和所述的第二扩增子；
(e)当所述第一扩增子和所述第二扩增子由所述PCR仪产生时，同时检测它们；并且
(f)与所述第二扩增子比较计算所述第一扩增子的相对量，因而所述第一扩增子的量指示Bt11DNA在所述生物样品中的量。
2.权利要求1所述的方法，其中所述方法具有小于或等于0.08％Bt11DNA浓度的定量限(LOQ)。
3.权利要求1所述的方法，其中所述方法具有小于或等于0.04％Bt11DNA浓度的检测限(LOD)。
4.权利要求1所述的方法，其中所述方法具有至少0.99的平均线性系数(R2)。
5.权利要求1所述的方法，其中所述方法在0.090％的Bt11DNA浓度具有24％或更小的相对重现性标准偏差(RSDR)。
6.权利要求1所述的方法，其中所述方法在0.090％的Bt11DNA浓度具有17％或更小的相对重复性标准偏差(RSDr)。
7.权利要求1所述的方法，其中所述方法在整个动态范围内具有±5％或更小的真实值。
8.包含由SEQ ID NO：1组成的第一引物和由SEQ ID NO：2组成的第二引物的一对引物，所述引物对在生物样品中存在玉米事件Bt11DNA模板的情况下一起发挥作用以产生用于确定玉米事件Bt11的扩增子。
9.一种由SEQ ID NO：3组成的多核苷酸探针。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于先正达参股股份有限公司，未经先正达参股股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201080033479.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
