[发明专利]松弛素肽合成

权利要求书

1.一种用于生产具有至少两条肽链，A和B，的胰岛素型肽的方法，

链A和链B通过至少一个二硫键连接，所述方法包括：

提供肽链A和链B，其中，每条链包含至少一个半胱氨酸残基且每条链可选地具有分子内二硫键，并且链B包含氧化的甲硫氨酸残基；

在使得形成至少一个分子间二硫键的条件下，使链A和链B结合，以使链A和链B连接在一起；以及

使所述氧化的甲硫氨酸残基还原以产生所述胰岛素型肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述胰岛素型肽为松弛素。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述松弛素为松弛素1或松弛素2，并且链A为松弛素A链且链B为松弛素B链，并且其中，在与链A结合后：

链B的至少一部分不具有分子内二硫键；或

存在还原剂，以还原链B的分子内二硫键。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，存在还原剂且所述还原剂选自具有游离半胱氨酸残基的链A和具有游离半胱氨酸残基的链B。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述还原剂包含具有游离半胱氨酸残基的链B。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，链B具有游离半胱氨酸基团且链A具有分子内二硫键。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述肽为选自松弛素1和松弛素2的松弛素，并且链A具有两个分子内二硫键，且链B的至少一部分不具有分子内二硫键。

8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中，所述松弛素为人松弛素1，且所述B链为Met(O)²⁴RLX1B或人松弛素2，且所述B链为Met(O)²⁵RLX2B。

9.一种用于生产松弛素的方法，包括：

提供具有至少一个分子内二硫键的松弛素A链，以及松弛素B链，其中所述B链的至少一个甲硫氨酸残基被氧化，所述B链可选地包含分子内二硫键；

在使得所述A链和所述B链之间形成至少一个分子间二硫键的条件下，使所述A链和所述B链结合，以将所述链连接在一起；以及

使所述氧化的甲硫氨酸残基还原，以产生所述松弛素。

10.一种合成生产的、分离的人松弛素1，和其药用盐、衍生物或前药。

11.一种用于生产具有至少两条肽链，A和B，的胰岛素型肽的方法，链A和链B通过至少一个二硫键连接并且链B具有至少一个氧化的甲硫氨酸残基，所述方法包括：

提供肽链A和链B，每条链包含至少一个半胱氨酸残基并且链B包含氧化的甲硫氨酸残基；

在使得链A中的至少一个半胱氨酸残基和链B中的至少一个半胱氨酸残基结合的条件下，使链A和链B结合，以使所述链连接在一起，从而产生具有氧化的甲硫氨酸残基的所述胰岛素型肽。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述包含甲硫氨酸氧化物的松弛素，通过使以下链结合：

线性松弛素A链和线性松弛素B链；

线性松弛素A链和环状松弛素B链；或

单环或双环松弛素A链和线性松弛素B链；以及

氧化得到的产物而产生。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述氧化利用DMSO、空气或过氧化氢进行。

14.根据权利要求11所述的方法，其中，所述包含甲硫氨酸氧化物的松弛素通过在还原剂的存在下使单环或双环松弛素A链和环状松弛素B链结合而产生。

15.一种包含一个或多个甲硫氨酸亚砜残基的生物活性的、合成松弛素，以及其药用盐、衍生物、或前药。

16.根据权利要求15所述的分离的合成人松弛素，其选自：

i)具有在图3中图示说明的序列的人Met(O)²⁴-松弛素1；

ii)具有在图4中图示说明的序列的人Met(O)²⁵-松弛素2；以及

iii)i)或ii)的药用盐、衍生物或前药。