[发明专利]用于产生甜蛋白的方法在审
| 申请号： | 201080034910.1 | 申请日： | 2010-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN102498126A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | J.文德;J.W.塔姆斯;L.贝尔;C.L.奥尔森 | 申请（专利权）人： | 诺维信公司 |
| 主分类号： | C07K14/43 | 分类号： | C07K14/43;C12N15/80;A23L1/236 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 史悦 |
| 地址： | 丹麦*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 产生 蛋白 方法 | ||
1.一种产生重组甜蛋白的方法，所述蛋白包含与SEQ ID NO：2的氨基酸2至54具有至少70％同一性的氨基酸序列，所述方法包括：
a)在有助于甜蛋白的产生的条件下培养包含核酸构建体的曲霉属(Aspergillus)宿主细胞，所述核酸构建体包含编码所述甜蛋白的多核苷酸；和
b)回收所述甜蛋白。
2.权利要求1的方法，其中所述甜蛋白以功能性形式自所述宿主细胞分泌。
3.前述任一项权利要求的方法，其中所述甜蛋白是Brazzein或Brazzein变体。
4.前述任一项权利要求的方法，其中所述宿主细胞是米曲霉宿主细胞或黑曲霉宿主细胞。
5.前述任一项权利要求的方法，其中所述核酸构建体包含可操作地连接于第一核苷酸序列和第二核苷酸序列的编码甜蛋白的多核苷酸，所述第一核苷酸序列编码包含与SEQ ID NO：2的氨基酸-55至-33具有至少70％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的信号肽，而所述第二核苷酸序列编码包含与SEQ ID NO：2的氨基酸-32至-1具有至少70％同一性的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的前肽。
6.前项权利要求的方法，其中所述甜蛋白是以信号肽和前肽已切割掉的形式回收的。
7.前述任一项权利要求的方法，其中所述核酸构建体包含一个或多个内含子序列。
8.一种包含与SEQ ID NO：1的核苷酸233至291具有至少70％同一性的核苷酸序列分离的多核苷酸，其编码甜蛋白。
9.包含前项权利要求的多核苷酸的核酸构建体，所述多核苷酸可操作地连接于一个或多个调控序列，所述调控序列指导所述甜蛋白在曲霉属宿主细胞中的产生。
10.前项权利要求的核酸构建体，其包含一个或多个内含子序列。
11.一种重组表达载体，包含权利要求9或10任一项的核酸构建体。
12.一种重组曲霉属宿主细胞，包含权利要求9或10任一项的核酸构建体或权利要求11的重组表达载体。
13.一种产生甜蛋白的方法，包括：
a)培养根据前项权利要求的曲霉属宿主细胞；和
b)回收所述甜蛋白。
14.一种增加供人消费的食物、饮料或医药产品的甜味的方法，包括下述步骤：将足量的甜蛋白添加至所述产物，从而使得该产物具有增加的甜味，其中所述甜蛋白是根据权利要求1-7任一项或权利要求13的方法产生的。
15.一种供人消费的食物、饮料或医药产品，包含根据权利要求1-7任一项或权利要求13的方法产生的甜蛋白。
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