[发明专利]T细胞受体

说明书

本发明涉及结合YLEPGPVTA肽(衍生自gp100蛋白)的T细胞受体(TCR)，所述肽以肽-HLA-A2复合物呈递，相对于天然gp100 TCRα和/或β可变域，所述TCR发生突变并且对所述复合物的结合亲和力和/或结合半衰期至少是参比gp100 TCR的两倍。

发明背景

YLEPGPVTA(SEQ ID No：1)肽对应于人糖蛋白100(gp100)的氨基酸残基号280-288。Gp100在黑色素瘤癌细胞上广泛而显著地过量表达。例如，一项研究(Trefzer等.，(2006)Melanoma Res.16(2)：137-45)发现28位黑色素瘤患者的192例黑色素瘤转移灶中有82％表达gp100。几项研究报道了黑色素瘤组织中gp100表达水平较高(Hofbauer等.，(2004)J Immunother.27(1)：73-8，Barrow等.，(2006)Clin Cancer Res.12：764-71)。YLEPGPVTA(SEQ ID No：1)肽由gp100⁺/HLA-A2癌细胞上的I类HLA分子呈递。(Salgaller等.，(1996)Cancer Res 56：4749-4757)。

因此，YLEPGPVTA HLA-A2复合物提供本发明TCR能靶向的癌症标记物。例如，本发明TCR可用于将细胞毒性剂递送至癌细胞的目的，或可转化入T-细胞，从而使得它们能破坏呈递HLA复合物的肿瘤细胞，以便在称为过继性治疗的治疗过程中给予患者。然而，为前一目的，如果TCR具有较高的亲和力和/或较慢的解离速率，从而该TCR能长期驻留在所靶向的肿瘤细胞上，则是理想的。为后一目的，如果TCR对肽-HLA复合物相比于具有该复合物特异性的天然TCR具有较高的亲和力和/或较低的解离速率，但不如前一目的的亲和力那样高，则是理想的。亲和力的急剧增加与TCR基因-修饰的CD8T细胞中抗原特异性丧失相关，从而能导致这些TCR-转染CD8T细胞的非特异性激活，因此中等亲和力TCR是过继性治疗所优选的(参见Zhao等.，(2007)J Immunol.179：5845-54；Robbins等.，(2008)J Immunol.180：6116-31；还参见公布的WO 2008/038002)。本发明提供此类TCR。

采用国际免疫遗传学(IMGT)TCR命名法描述TCR，将其与TCR序列的IMGT公开数据库相关联。天然α-β异源二聚TCR具有α链和β链。广义上，各链包含可变区、连接区和恒定区，β链通常还在可变区和连接区之间含有短的多变区，但该多变区常视作连接区的一部分。各可变区包含嵌合在框架序列中的3个CDR(互补决定区)，其中一个是称为CDR3的超变区。根据框架、CDR1和CDR2序列以及部分确定的CDR3序列，α链可变(Vα)区可分成几类，β链可变(Vβ)区可分成几类。在IMGT命名法中，通过唯一的TRAV编号指代Vα类型。因此，“TRAV17”限定了具有独特框架及CDR1和CDR2序列和CDR3序列的TCR Vα区，所述CDR3序列部分由TCR之间保守性的氨基酸序列确定，但其还包含TCR之间不同的氨基酸序列。“TRBV19”以相同方式限定了具有独特框架及CDR1和CDR2序列的TCR Vβ区，但仅包含部分确定的CDR3序列。

通过独特的IMGT TRAJ和TRBJ命名法类似地确定TCR的连接区，通过IMGT TRAC和TRBC命名法确定恒定区。

IMGT命名法通过缩写TRBD指代β链多变区，如上所述，连锁的TRBD/TRBJ区常一起视作连接区。

αβTCR的α和β链常视作各自具有两个“结构域”，即，可变域和恒定域。可变域由连锁的可变区和连接区构成。因此，在本申请的说明书和权利要求书中，术语“TCR α可变域”指连锁的TRAV和TRAJ区，术语TCR α恒定域指胞外TRAC区或C-末端截短的TRAC序列。类似地，术语“TCR β可变域”指连锁的TRBV和TRBD/TRBJ区，术语TCR β恒定域指胞外TRBC区或C-末端截短的TRBC序列。

TCR领域的工作人员广为知晓并可得到IMGT命名法确定的独特序列。例如，可在IMGT公开数据库中找到。“《T细胞受体手册(T cell receptor Factsbook)》”，(2001)，LeFranc和LeFranc，学术出版社(Academic Press)，ISBN 0-12-441352-8还公开了IMGT命名法确定的序列，但由于其公布日期和随后的时间滞后，有时需要参考IMGT数据库验证其中的信息。