[发明专利]包含甘露糖启动子的载体和甘露糖启动子

权利要求书

1.在原核宿主细胞中可表达的载体，其包含可操作地连接于转录单元的枯草芽孢杆菌的甘露糖操纵子的甘露糖可诱导启动子，所述转录单元包括编码多肽的异源核酸序列。

2.根据权利要求1的载体，其中所述载体包含完整的或一部分的调节基因manR的序列。

3.根据权利要求1或2的载体，其中所述启动子是manP启动子。

4.根据权利要求1-3任一项的载体，其中所述manP启动子包括选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的序列，其互补序列或其变体。

5.根据权利要求1的载体，其中所述启动子是manR启动子。

6.根据权利要求5的载体，其中所述manR启动子包括选自SEQID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5的序列，其互补序列或其变体。

7.前述权利要求任一项的载体，其中所述载体包括处于所述异源核酸序列上游的分解代谢物应答元件。

8.前述权利要求任一项的载体，其中所述载体包括位于所述异源核酸序列下游的转录终止序列。

9.根据权利要求8的载体，其中所述转录终止序列衍生自枯草芽孢杆菌的tufA基因的3’区。

10.前述权利要求任一项的载体，其中所述载体是在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中可复制的穿梭载体。

11.前述权利要求任一项的载体，其中所述载体包括质粒pUC18的复制起始点和/或pBS72复制子或rep基因以及质粒pUB110的复制起始点。

12.前述权利要求任一项的载体，其中所述异源核酸序列编码抗体或其片段。

13.前述权利要求任一项的载体，其中所述manP基因或manR基因的转录起始区被另一基因的转录起始区替换。

14.权利要求13的载体，其中所述manP基因或manR基因的转录起始区被tufA基因或gsiB基因的转录起始区替换。

15.枯草芽孢杆菌的甘露糖操纵子的甘露糖可诱导启动子区的分离且纯化的核酸序列，其互补序列或其变体。

16.权利要求15的分离且纯化的核酸序列，其中所述序列包括SEQ ID NO：1-5的任意项，其互补序列或其变体。

17.以权利要求1-14任一项的载体或以权利要求15或16任意项的核酸序列转化的原核宿主细胞。

18.根据权利要求17的原核宿主细胞，其中所述原核宿主细胞经历碳分解代谢物阻抑并包括磷酸烯醇丙酮酸：碳水化合物磷酸转移酶系统。

19.根据权利要求17或18的原核宿主细胞，其中所述原核宿主细胞是革兰氏阳性的。

20.根据权利要求18或19任意项的原核宿主细胞，其中所述宿主细胞属于硬壁菌门(Firmicutes)。

21.用于在原核宿主细胞中产生多肽的方法，包括以下步骤：构建权利要求1-14任一项的载体；以所述载体转化原核宿主细胞；通过使转化的宿主细胞在适当的条件下在细胞培养基中生长而允许表达所述多肽；和，从所述细胞或从细胞培养物中回收多肽。

22.根据权利要求21的方法，其中所述宿主细胞首先在存在不同于诱导子的碳源的情况下生长，然后在第二步骤中在存在诱导子的情况下生长。

23.权利要求1-14任一项的载体或权利要求15和16的任意项的分离且纯化的核酸序列用于调节编码多肽的异源核酸序列在原核宿主细胞中的表达的用途。