[发明专利]具有发夹构象的嵌合引物及其使用方法

权利要求书

1.一种用作引物的核酸分子，其包含：

(a)10-40个核苷酸长的靶标特异性引物序列；

(b)所述靶标特异性引物序列5’的抗标签序列；

(c)所述抗标签序列5’的标签序列，其中所述抗标签序列和所述标签序列各自为6至60个核苷酸长；和

(d)所述抗标签序列与所述标签序列之间的能够阻止聚合酶延伸至标签序列的间隔区。

2.权利要求1的核酸分子，其中所述抗标签序列和标签序列的长度各为12至24个核苷酸。

3.权利要求1的核酸分子，其中所述抗标签序列的长度为12个核苷酸。

4.权利要求1的核酸分子，其中所述抗标签序列和标签序列的长度均为24个核苷酸。

5.权利要求1的核酸分子，其中所述间隔区是iSp18部分或者iMe-isodC部分。

6.一种组合物，其包含：

(a)微球；

(b)与所述微球共价连接的第一抗标签核酸；

(c)与所述第一抗标签核酸杂交的标签核酸，其中所述抗标签核酸和所述标签核酸各自为6至60个核苷酸长；

(d)共价连接在所述标签序列3’的能够阻止聚合酶延伸至标签序列的间隔区；

(e)第二抗标签核酸，其具有与所述第一抗标签核酸中至少8个连续核苷酸一致的序列，并且共价连接在所述间隔区的3’；

(f)共价连接在所述第二抗标签核酸3’的10-40个核苷酸长的靶标特异性核酸；

(g)与所述第二抗标签核酸和靶标特异性核酸杂交的核酸分子，其中所述核酸分子包含与所述抗标签核酸和所述靶标特异性核酸互补的序列。

7.权利要求6的组合物，其中所述微球被荧光标记。

8.权利要求6的组合物，其中所述微球是磁性的。

9.权利要求6的组合物，其中与所述第二抗标签核酸和所述靶标特异性核酸杂交的核酸分子与报告物分子共价偶联。

10.一种组合物，其包含：

(a)第一核酸分子，其中所述第一核酸分子是引物对的第一成员，其包含：

(i)10-40个核苷酸长的第一靶标特异性引物序列；

(ii)所述靶标特异性引物序列5’的抗标签序列；

(iii)所述抗标签序列5’的标签序列，其中所述抗标签序列和所述标签序列各自为6至60个核苷酸长；和

(iv)所述抗标签序列与标签序列之间的能够阻止聚合酶延伸至标签序列的间隔区；

(b)第二核酸分子，其中所述第二核酸分子是引物对的第二成员，其包含：

(i)10-40个核苷酸长的第二靶标特异性引物序列；

(ii)所述靶标特异性引物序列5’的通用抗标签序列；

(iii)所述抗标签序列5’的通用标签序列，其中所述通用抗标签序列和所述通用标签序列各自为6至60个核苷酸长；和

(iv)所述抗标签序列与标签序列之间的能够阻止聚合酶延伸至标签序列的间隔区；

(c)第三核酸分子，其包含：

(i)与所述通用标签序列互补的通用抗标签序列；和

(ii)标记物。

11.权利要求10的组合物，其中所述标记物是荧光标记物。

12.权利要求11的组合物，其中所述荧光标记物是Cy3标记物。