[发明专利]基于AFF-4表达筛选抗白发剂的方法

说明书

技术领域

本发明提供了使用AFF-4作为指示物的筛选抗白发剂的组合物和方法，以及通过该方法筛选的抗白发剂(anti-graying agents)。

背景技术

决定毛发颜色的黑色素，是在存在于毛球上部的黑素细胞(合成黑色素的细胞)内的黑素体中从酪氨酸生物合成之后供应给毛发的。尽管认为白发与因素(例如衰老或压力)造成的下列方面有关：黑素细胞或黑素体的减少、由上述这些细胞或器官的异常而引起酪氨酸酶的量或活性的降低、或黑素体转运的损伤，还不清楚其中全部的机制。

先前已经报道了很多物质具有抗白发作用例如防止白发生成(graying)或抑制白发生成，并且例如，尽管在秦椒(Zanthoxylum piperitum)提取物中报道了这类抗白发作用(参见日本未审查专利公开号H11-5720)，有丰富具有相等或更高的抗白发作用的活性成分的需要。

已知在色素细胞中在以Foxn1形式的转录因子活化后色素形成加速(参见Weiner，等人，(2007)Cell，130：932-942，专用上皮受体细胞确定色素形成模式(Dedicated Epithelial Recipient Cells Determine Pigmentation Patterns))。Foxn1是存在于上皮细胞中控制bFGF表达的转录因子。

发明内容

本发明的目标是阐明在滤泡色素细胞中色素形成的机制，并提供一种或多种现有技术未发现的有效的抗白发剂以及含有其的抗白发组合物。

本发明的发明人发现存在于滤泡上皮细胞中的AFF-4分子与Foxn1结合并促进其转录活性，并且在人类中AFF-4在表皮中不存在而仅在毛囊的上皮细胞中表达。而且，在人白发中发现AFF-4、Foxn1和bFGF都明确地降低。基于这些结果，首次显示了通过AFF-4介导，物质能够只作用于存在于毛囊中的色素细胞。

为了发现其实施方案，使用人毛囊的上皮细胞搜索能够诱导AFF-4表达的物质。结果发现，灵芝(Ganoderma lucidum(Fr.)Karst)提取物、人参(Panax schinseng Nees)提取物、稻(Oryza sativa)糠提取物、毛叶香茶菜(Rabdosia japonicus)提取物和秦椒(Zanthoxylum piperitum)提取物加速AFF-4表达。而且，在人滤泡上皮细胞中已经证实了灵芝提取物和秦椒提取物的bFGF表达加速作用。相应地，在人滤泡上皮细胞中已经证实了支持从AFF-4到Foxn1然后到bFGF的信号传递的假说。当在人表皮细胞中尝试验证灵芝提取物和秦椒提取物的bFGF表达加速作用时，在相同的细胞中对于任何受测试的物质未观察到bFGF表达加速作用，从而说明在人滤泡上皮细胞中的AFF-4表达加速和bFGF表达加速是这些细胞特有的现象。

基于以上所述，借助于相邻的滤泡上皮细胞，使用前述物质特定地激活滤泡色素细胞是可能的。

因此，在其第一个方面，本发明提供了筛选抗白发剂的方法。通过对细胞施用候选物质并且评估AFF-4在细胞中的表达，使用此筛选方法以选择和/或鉴定加速AFF-4在细胞中表达的物质。在某些实施方案中，细胞是滤泡上皮细胞。

在其一些实施方案中，通过测量自细胞提取的编码AFF-4的mRNA的量评估在细胞中AFF-4表达的加速，通过例如PCR和实时PCR。

在其第二个方面，本发明提供用前述筛选方法筛选的物质，并且更特别地，提供含有至少一种类型的对加速AFF-4在细胞中(例如，在滤泡上皮细胞中)的表达有效的量的草本植物提取物的抗白发剂，所述草本植物提取物选自灵芝提取物、人参提取物、稻糠提取物和毛叶香茶菜提取物。

在其第三个方面，本发明提供使用以前述筛选方法选择的物质加速AFF-4在细胞中(例如，在滤泡上皮细胞中)表达的方法，并且更特别地，使用至少一种类型选自灵芝提取物、人参提取物、稻糠提取物和毛叶香茶菜提取物和秦椒提取物的草本植物提取物。

在其第四个方面，本发明提供防止或抑制白发的方法，所述方法包括：通过将以前述筛选方法选择的物质，并且更特别地，至少一种类型的草本植物提取物，以对加速AFF-4在细胞中(例如，在滤泡上皮细胞中)的表达有效的量，涂覆在头皮上加速AFF-4的表达，所述草本植物提取物选自灵芝提取物、人参提取物、稻糠提取物、毛叶香茶菜提取物和秦椒提取物。