[发明专利]包含重组HCG的药物制剂

说明书

本发明涉及用于治疗不育的促性腺激素。具体地，本发明涉及人绒毛膜促性腺激素(hCG)。

所述促性腺激素是一组在男性和女性中调节生殖腺功能的异二聚体糖蛋白激素。它们包括促卵泡激素(FSH)，黄体生成素(LH)和绒毛膜促性腺激素(CG)。

人绒毛膜促性腺激素(hCG)由垂体前叶腺自然分泌，并且发挥功能以支持卵泡发育和排卵。hCG包含对于其它糖蛋白激素LH和FSH也是常见的92个氨基酸的α亚基，以及赋予该激素特异性的hCG独有的145个氨基酸的β亚基。每个亚基通过添加复杂的糖残基进行翻译后修饰。α亚基包含在氨基酸52和78处的2-N-连接的糖基化位点，β亚基包含在氨基酸13和30处的2-N-连接的糖基化位点和在氨基酸121、127、132和138处的4个O-连接的糖基化位点。

从怀孕妇女的尿液中提取的hCG[Choragen(Ferring)]已经在不育治疗中使用了许多年。从尿液中提取的hCG的产生包括大量尿液的收集和处理。重组形式的hCG，即Ovitrelle(Serono)是可获得的。这在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。已知的重组hCG产物具有与从人尿中产生的hCG不同的药物代谢动力学模式。具有更紧密地重复或模拟从人尿中产生的产物的药物代谢动力学模式的hCG产品是合乎需要的。

存在与hCG制剂相关的相当大的异质性，其涉及在存在的各种同种型的量上的不同。单独的hCG同种型显示相同的氨基酸序列，但是在它们翻译后修饰的程度上不同；具体的同种型特征为糖分枝结构的异质性以及唾液酸(末端糖)结合量的不同，这两者都显示影响具体的同种型生物活性。

天然hCG的糖基化是高度复杂的。在自然来源的垂体hCG中的聚糖可以包含广泛范围的结构，其可以包括二触角聚糖、三触角聚糖和四触角聚糖的组合。所述聚糖可以具有其它的修饰：核心岩藻糖基化、平分型葡糖胺、用乙酰基乳糖胺延伸的链、部分或完全唾液酸化(sialylation)，具有α2，3和α2，6连接的唾液酸化，和取代半乳糖的硫酸化的半乳糖胺。此外，在单独的糖基化位点的聚糖结构的分布之间存在差异。

重组hCG(“rhCG”)产品的糖基化反映在宿主细胞系中存在的糖基转移酶范围。现存的rhCG产品Ovitrelle源自改造的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)。在CHO来源的rhCG中的聚糖修饰范围比在源自尿液的天然产物中发现的那些更有限。在CHO来源的rhCG中发现的减少的聚糖异质性的实例包括缺少平分型葡糖胺和降低含量的核心岩藻糖基化和乙酰基乳糖胺延伸。此外，CHO细胞仅能够使用α2，3连接加入唾液酸(Kagawa等，1988，Takeuchi等，1988，Svensson等.，1990)。这不同于天然产生的hCG，其包含具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸混合物的聚糖。

已经证实当与垂体、血清或绝经期后尿液FSH比较时，重组FSH制剂(Organon)在具有低于4的等电点(pI)的FSH(考虑酸性同种型)的量上不同(Ulloa-Aguirre等.1995)。与重组产物Gonal-f(Serono)和Puregon(Organon)比较，在尿制备物中的酸性同种型的量高得多(Andersen等.2004)。这必定反映在rFSH中更低摩尔含量的唾液酸，因为用硫酸盐修饰的带负电荷的聚糖的含量在FSH中很低。与天然FSH比较，更低的唾液酸含量是两种商购FSH产品的特征，并且因此必定反映制备方法中的限制(Bassett和Driebergen，2005)。已经关于来自多种来源的物质记载了FSH的循环寿命。这些物质中的一些已经基于总分子电荷进行分离，总分子电荷如通过它们的pI表征，其中更多的酸等同于更高的负电荷。对于总分子电荷的主要贡献者是每种FSH分子的总唾液酸含量。例如，rFSH(Organon)具有约8mol/mol的唾液酸含量，而尿来源的FSH具有更高的唾液酸含量(de Leeuw等.1996)。在大鼠中的相应血浆清除率是0.34和0.14ml/min(Ulloa-Aguirre等.2003)。在另一个实例中，其中将重组FSH样品分为高和低pI级分，高pI(更低唾液酸含量)级分的体内功效减少并且其具有更短的血浆半衰期(D’Antonio等.1999)。本发明人已经发现，与FSH类似，已知的来源于CHO的重组hCG产物(例如，Ovitrelle)也具有比尿hCG更低量的具有低于4的等电点(pI)(认为是酸性同种型)的hCG，这也反映已知的rhCG产品比尿hCG更低的唾液酸含量。