[发明专利]来自鸡卡氏杆菌的细胞溶解性RTX-毒素

权利要求书

1.一种分离的多肽，所述多肽包含选自以下群组中的氨基酸序列

a)SEQ ID No.1、2或3；

b)选自由SEQ ID No.1、2和3构成的组的氨基酸序列的序列变异体，其中所述变异体与所述SEQ ID No.具有至少70％的序列同一性；以及

c)由a)中的任一者的至少150个连续氨基酸所组成的片段，其中所选序列中指定的任一氨基酸改变为不同氨基酸，限制条件是所述序列中不超过30个所述氨基酸被如此改变。

2.如权利要求1所述的多肽，其为选自由SEQ ID No.1、2和3构成的组的序列的天然存在的等位基因变异体。

3.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含源自巴斯德杆菌科，更优选为源自卡氏杆菌属，更优选选自由鸡卡氏杆菌、卡氏杆菌基因种1及卡氏杆菌基因组2构成的组的氨基酸序列。

4.如权利要求1所述的多肽，其为在此描述的变异多肽，其中所选序列中指定的任一氨基酸被改变以提供保守性取代。

5.如权利要求1所述的多肽，其中所述信号肽由异源信号肽置换。

6.如权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID No.1具有至少70％的序列同一性，更优选为至少75％，更优选为至少80％，更优选为至少85％，更优选为至少90％，更优选为至少95％，更优选为至少98％，更优选为具有所述SEQ ID No.1的序列的多肽。

7.如权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID No.2具有至少70％的序列同一性，更优选为至少75％，更优选为至少80％，更优选为至少85％，更优选为至少90％，更优选为至少95％，更优选为至少98％，更优选为具有所述SEQ ID No.2的序列的多肽。

8.如权利要求1所述的多肽，其与SEQ ID No.3具有至少70％的序列同一性，更优选为至少75％，更优选为至少80％，更优选为至少85％，更优选为至少90％，更优选为至少95％，更优选为至少98％，更优选为具有所述SEQ ID No.3的序列的多肽。

9.如权利要求1所述的多肽，或其片段，其中所述片段包含至少150个氨基酸，优选为至少200个氨基酸，更优选为至少300个氨基酸，更优选为至少500个氨基酸，更优选为至少750个氨基酸，更优选为至少1000个氨基酸，更优选为1250个氨基酸，更优选为1500个氨基酸，更优选为1750个氨基酸，最优选为2000个氨基酸。

10.如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽已经过特定修饰而移除毒性活性。

11.如权利要求1所述的多肽，其中所述变异体是具有生物活性的。

12.如权利要求11所述的多肽，其中生物活性为毒性，其中所述毒性包含在接受体内形成孔，更优选为细胞毒性，更优选为细胞溶解性细胞毒性，甚至更优选为溶血性细胞毒性。

13.如权利要求9至11所述的多肽，其中所述变异体具有免疫原性。

14.如权利要求9所述的多肽，其中所述片段与SEQ ID NO 1相比含有不超过30个氨基酸取代，更优选为不超过25个，更优选为不超过20个，更优选为不超过15个，更优选为不超过10个，更优选为不超过5个，更优选为不含氨基酸取代。

15.如前所述的权利要求中任一项所述的多肽，其进一步包含亲和性标签，诸如polyHis标签、GST标签、HA标签、FLAG标签、C-myc标签、HSV标签、V5标签、麦芽糖结合蛋白标签、纤维素结合域标签、BCCP标签、钙调蛋白标签、Nus标签、谷胱甘肽-S-转移酶标签、绿色荧光蛋白标签、硫氧还蛋白标签、S标签、Strep标签。

16.如权利要求15所述的多肽，其中任一亲和性标签是可切割的。

17.如权利要求1至16中任一项所述的多肽，其为失活的。

18.如权利要求17所述的多肽，其中所述多肽通过热或辐射而失活。

19.如权利要求17所述的多肽，其中所述多肽为化学失活的，优选通过暴露于甲醛而化学失活。

20.如权利要求17所述的多肽，其中所述多肽是SEQ ID No.1的未酰化形式。