[发明专利]来自鸡卡氏杆菌的细胞溶解性RTX-毒素

说明书

本申请中或本申请所引用的所有专利及非专利文献，在此亦以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明属于动物健康领域且特别是由卡氏杆菌属(Gallibacterium spp)，包括鸡卡氏杆菌(Gallibacterium anatis)、卡氏杆菌基因种1(Gallibacterium genomospecies 1)和卡氏杆菌基因种2(Gallibacterium genomospecies 2)所引起的新细菌性家禽疾病的病原体。本发明提供来自卡氏杆菌(Gallibacterium)物种的新型RTX毒素，将该新型毒素称为GtxA(卡氏杆菌毒素)。此外，本发明提供GtxA的氨基酸及核苷酸序列，包含失活的类毒素或类毒素片段的疫苗，以及免疫禽类来预防该疾病的方法及诊断禽类的鸡卡氏杆菌感染的方法。

背景技术

在过去十年间，在所有主要的家禽生产国中提高生产率的密集型家禽饲养法造成了疾病表现的增加。这引起了对于控制这些疾病的新型及较佳疫苗及疫苗接种计划的需求增加。如今，已对多种动物进行了针对大量病毒及细菌源性疾病的免疫。家禽病毒性疾病的例子如鸡新城疫(Newcastle Disease)、传染性支气管炎(Infectious Bronchitis)、禽肺炎病毒(Avian Pneumovirus)、禽痘(Fowlpox)、传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease)等。细菌性疾病的例子如由副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum)(上呼吸道)、禽波氏杆菌(Bordetella avium)(上呼吸道)、鼻气管鸟杆菌(Omithobacterium rhinotracheale)(下呼吸道)所引起的禽鼻炎(Avian Coryza)，沙门氏菌感染(Salmonella infections)(消化道)，鸡霍乱(fowl cholera)(败血症)的病原体多杀性巴斯德菌，(Pasteurella multocida)以及大肠杆菌(E.coli)感染。

产蛋家禽生殖器官及腹膜的炎症是商业产蛋家禽群体中经常发生的问题，引起产蛋量下降、死亡率增加以及随之而来的经济损失及动物福利下降。常常从这些病变中分离出禽病原性大肠杆菌，但若干研究已表明，鸡卡氏杆菌单独或作为共病原体是卵巢炎、输卵管炎及腹膜炎的常见原因。此外，已从禽败血症、肝炎、肠炎及上呼吸道病变病例中分离出鸡卡氏杆菌(G.anatis)。鸡卡氏杆菌是产蛋母鸡及其他禽类物种的上呼吸道与下生殖道正常菌群的常见部分(Bojesen A.M.，Nielsen S.S.，Bisgaard M.，Prevalence and transmission of haemolytic Gallibacterium species in chicken production systems with different biosecurity levels，Avian Pathol.(2003)32：503-510)，且因此可被视为机会性病原体。未深入研究其发病机制，尤其没有在分子水平上深入研究，而且对鸡卡氏杆菌引发疾病能力背后的基因及机制知之甚少。鸡卡氏杆菌(G.anatis)分为2个生物变种：β-溶血性生物变种溶血型鸡卡氏杆菌及非溶血性生物变种鸡卡氏杆菌。溶解红血球的能力是病原性鸡卡氏杆菌分离株的主要表型(Christensen H.，Bisgaard M.，Bojesen A.M.，Mutters R.，Olsen J.E.，Genetic relationships among avian isolates classified as Pasteurella haemolytica，′Actinobacillus salpingitis′or Pasteurella anatis with proposal of Gallibacterium anatis gen.nov.，comb，nov and div of additional genomospecles within Gallibacterium gen.nov，Int.J.Syst.Evol.Microbiol.(2003)53：275-287)。卡氏杆菌是属于γ-变形菌(γ-proteobacterial)巴斯德菌科(Pasteurellaceae)的革兰氏阴性菌属(Christensen等人，同上)，且巴斯德菌科的各种病原性成员，如引发人类牙周病的伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)，牛运输热(bovine shipping fever)的病原体溶血曼海姆菌(Mannheimia haemolytica)以及猪病原体胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)产生属于RTX-毒素(RTX是毒素重复单元的缩写)群组的溶血素及白细胞毒素。