[发明专利]用于评估肝病变的方法

说明书

相关申请

本申请要求于2009年9月11日提交的美国专利第61/241,709号的优先权，其内容通过引用整体并入。

发明背景

许多潜在威胁生命的肝疾病影响大部分人群。一个这样的实例是乙型肝炎——由乙型肝炎病毒(HBV)引起的肝传染病。由于乙型肝炎可能引起慢性肝疾病，最终可导致肝硬化和肝癌，因此其是主要的全球性健康问题和最严重的病毒性肝炎类型。世界范围内估计有20亿人感染了HBV，并且多于3.5亿人患有慢性肝传染病，尽管许多是无症状的。乙型肝炎在中国和亚洲其他地区是地方流行病。那些地区的大部分人在童年时期已感染了HBV，并且8％至10％的成年人口是慢性感染的。由HBV引起的肝癌处于男性中癌症三大致死原因的首位，也是女性中癌症的主要原因。

已开发且在临床中常规使用了许多肝功能检测。例如，为了评估肝功能的目的，可检测患者血样的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素或γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平。然而，由于肝疾病的流行性和早期检测和治疗的至关重要性，尤其是鉴于大部分肝疾病最初仅表现出轻度症状的事实，存在对可允许早期诊断肝疾病的新的且更灵敏方法的需要。本发明满足了这种或其他相关需要。

发明简述

一方面，本发明提供了用于检测没有肝疾病指征的个体中肝疾病的方法，所述个体例如从来没有异常的丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测结果的人。所述方法包括以下步骤：(a)测定取自所述个体的无细胞血样中白蛋白mRNA的量或浓度；以及(b)将步骤(a)的白蛋白mRNA的量或浓度与标准对照进行比较。与标准对照相比时，步骤(a)得到的蛋白mRNA的量或浓度增加表示个体中存在肝疾病。反之，步骤(a)得到的蛋白mRNA的量或浓度与标准对照基本相同，认为所述个体没有肝疾病。

在一些实施方案中，受检测的个体是没有肝疾病发生风险的人。待检测的肝疾病的一些实例包括脂肪肝疾病如非酒精性脂肪肝病、肝硬化、肝纤维化或肝炎(例如甲型肝炎、乙型肝炎或丙型肝炎)。其他实例包括威尔森氏症、血色病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症或糖原贮积病。在一些实施方案中，使用本发明方法检测的肝疾病名单中不包括肝细胞癌，特别是肝移植患者中出现的肝细胞癌。

在一些实施方案中，无细胞血样是血浆。在其他实施方案中，无细胞血样是血清。

在所要求保护方法的一些实施方案中，步骤(a)包括扩增白蛋白mRNA序列，例如通过聚合酶链式反应(PCR)，包括反转录酶(RT)-PCR、数字PCR或实时定量PCR。在其他实施方案中，步骤(a)包括质谱分析或与微阵列、荧光探针或分子信标杂交。

在一些情况下，所要求保护的方法还可以包括在稍后时间利用来自所述个体的同一类型的无细胞血样重复步骤(a)(例如步骤(a)使用血清样品时，重复步骤使用另一血清样品)。当原步骤(a)得到的量或浓度已表明存在肝疾病时，与原步骤(a)相比，在稍后时间(即从重复的步骤(a)得到的)白蛋白mRNA的量或浓度增加表示肝疾病的恶化，而降低则表示肝疾病的改善。

同样，所要求保护的方法还可以包括，当原步骤(a)得到的白蛋白mRNA的量或浓度表示没有肝疾病时，在稍后时间利用来自所述个体的同一类型的无细胞血样重复步骤(a)。与原步骤(a)相比，在稍后时间(即重复的步骤(a))的白蛋白mRNA的量或浓度增加，表示出现肝疾病，而基本上没有差异则表示没有肝疾病的生理状况。

所要求保护的方法常常以至少1个标准偏差从标准对照增加或降低。在其他情况下，从标准对照这样的增加或降低可以为至少2、甚至3个标准偏差。

另一方面，本发明提供了用于诊断没有肝疾病指征的个体或没有肝疾病发生风险的人中肝疾病的试剂盒。所述试剂盒包含这些成分：(1)提供健康个体血样中白蛋白mRNA平均量或浓度的标准对照；以及(2)用于特异性扩增至少一部分白蛋白mRNA的两种寡核苷酸引物。一般而言，试剂盒还包含辅助使用者实施本发明方法的说明手册。试剂盒还可以包含与白蛋白编码序列特异性杂交的多核苷酸探针。