[发明专利]抗体糖基化变体

说明书

背景技术

技术领域

本发明涉及对抗体的Fc序列和其他含Fc的分子的评价，更具体地讲，本发明涉及制备、改变和使用抗体制剂和其他含Fc的分子以改变对蛋白酶的敏感性的方法。

关于本领域的讨论

Fc域内的氨基酸修饰可具有可视为变构效应的作用，也就是说，从远处影响Fc构象。具体地说，经证实，CH3域中的氨基酸置换会影响与Fc-γ受体的结合，所述受体会在两条重链之间的链间二硫键下方(下绞链区)也就是在CH2域结合抗体(Shields et al.(2001)J Biol Chem 276：6591；Stavenhagen et al.(2007)Cancer Res 67：8882(Shields等人，2001年，《生物化学杂志》，276卷，第6591页；Stavenhagen等人，2007年，《癌症研究期刊》，第67卷，第8882页))。

在成熟抗体中，连接到Asn297的两个复合双分支低聚糖包埋在CH2域之间，形成与多肽主链的广泛接触。已经发现的是，它们的存在是抗体介导诸如ADCC的效应子功能所必需的(Lifely，M.R.，et al.，Glycobiology 5：813-822(1995)；Jefferis，R.，et al.，Immunol Rev.163：59-76(1998)；Wright，A.and Morrison，S.L.，supra(Lifely，M.R.等人，《糖生物学》，第5卷，第813-822页，1995年；Jefferis，R.等人，《免疫学综述》，第163卷，第59-76页，1998年；Wright，A.和Morrison，S.L.，出处同上))。其他人和本专利申请人(WO2007005786)的研究已进一步证实，Fc区中这些天然附着的聚糖的低聚糖组分也会改变该多肽链各个非相邻位点中的Fc受体结合亲和力及蛋白酶敏感性(Raaju，S.T.2008 Curr Op Immunol 20：471-478(Raju，S.T.，2008年，《免疫学新观点》，第20卷，第471-478页)；WO2007024743)。

因此，随着人们对抗体分子各种构象方面的深入理解以及建模和蛋白质工程技术的不断成熟，如今可以靶向候选治疗性抗体内的区域进行修饰，以为了特定用途或适应症匹配期望的体内相互作用谱。这种修饰可提供改进的、安全性得到保持的抗体治疗剂。

发明内容

本发明提供了经过修饰、糖基化的免疫球蛋白恒定域的组合物，其可用于工程化改造抗体或抗体类治疗剂，例如包含这样的Fc区的抗体或抗体类治疗剂，所述Fc区具有一个或多个经工程化改造的、天冬酰胺(Asn)连接的糖基化位点(“N-糖基化”)。

在本发明的一个实施例中，第359位具有来自第361位的突变的N-糖基化位点和/或第419位具有来自第421位的突变的N-糖基化位点。另外，Asn297位处存在天然的Fc糖基化，在另一个实施例中可不存在天然的Fc糖基化。抗体衍生的构建体为源自或包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4序列的二聚蛋白结构。在一个方面，所述构建体在铰链区中的第228、234或235位(Kabat EU编号)含有氨基酸置换。

本发明的另一目标是提供基于经修饰的糖基化免疫球蛋白恒定域的、与具有类似未修饰免疫球蛋白恒定域的化合物相比性质有所改进的化合物；所述性质包括但不限于蛋白酶敏感性、血清半衰期和Fc受体结合。

本发明又一个目标是提供用于增强糖基化抗体制剂抵抗蛋白酶切割的能力的组合物和方法，由此提供用于治疗与蛋白酶含量升高相关的病理状况(例如癌症)的抗体制剂。在本方法的另一个实施例中，含糖基化Fc的蛋白质为抗体，优选地为治疗性单克隆抗体。其切割活性要抑制的蛋白酶选自胃蛋白酶、纤溶酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、基质金属蛋白酶、丝氨酸内肽酶和半胱氨酸蛋白酶，其来源于宿主或病原体，病原体可以为寄生虫、细菌或病毒。在一个具体的实施例中，蛋白酶是基质金属蛋白酶，所述基质金属蛋白酶选自明胶酶A(MMP2)、明胶酶B(MMP-9)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、溶基质蛋白酶(MMP-3)和巨噬细胞弹性蛋白酶(MMP-12)。所述修饰可引入到抗体序列中。本发明所公开的经修饰的构建体对生理相关蛋白酶表现出更强抗性。

附图说明