[发明专利]干细胞条件培养基组合物

说明书

本发明涉及用于药学、美容和药用美容(cosmeceutical)应用的组合物，特别是用于包括病变和烧伤的治疗在内的伤口愈合的组合物。

干细胞由于其形成多种类型的细胞的能力而在许多治疗、美容和药用美容领域十分引人关注。参见例如EP 0980270。此外，已披露了用于供细胞(包括干细胞)生长的培养基，其因生长细胞将蛋白质和其它因子分泌到培养基中而用于治疗、美容和药用美容应用。参见例如US7,118.746、US7,160,726和WO2008/020815。仍然需要鉴定用于治疗、美容和药用美容目的的备选组合物。特别需要鉴定产生不被用于支持干细胞生长的蛋白质性物质污染的条件培养基的方法。此外，可能特别需要鉴定制备条件培养基的有效的可规模化的方法。

按照本发明的第一个方面，提供包含如下获得的条件细胞培养基的药物组合物：a)将选自真皮鞘细胞、真皮成纤维细胞或真皮乳头细胞的保持干细胞潜能的分化人细胞培养在生长培养基中；和b)将培养基与细胞分离。

可用于本发明的第一个方面的生长培养基是足以满足细胞生长的培养基。细胞培养方法和培养基为本领域所熟知，包括补充血清的基础培养基、无血清培养基、无蛋白质培养基或化学成分确定的生长培养基。生长培养基通常包含必需氨基酸、糖、盐、维生素、矿物质/无机盐、痕量金属、脂质和核苷，并补充有支持细胞增殖所必需的各种其它组分，例如血清、蛋白质(例如胰岛素、运铁蛋白、生长因子和其它激素)、抗生素(例如庆大霉素、链霉素、青霉素)、附着因子(例如纤连蛋白、胶原、层粘连蛋白)。可组合(例如在血清的情况下)或单独加入补充成分。生长培养基为细胞提供满足特定细胞类型在受控体外环境中生长的营养需要的必需成分。

在一个实施方案中，细胞培养过程在一个培养容器中操作，将细胞直接接种到装有微载体的培养容器中，细胞增殖直到达到所需细胞密度。在其它实施方案中，细胞培养过程在至少两个完全不同的细胞培养容器/系统中操作，例如一个或多个种子细胞扩繁容器接着是细胞生产容器。这种多重种子细胞扩繁过程优选利用尺寸递增的培养容器直到得到足够的细胞数目用于最终生产细胞培养容器的接种。种子细胞扩繁培养容器可为相同类型(例如组织培养瓶、摇瓶、滚瓶、转瓶(spinner flask)、wave生物反应器、搅拌釜生物反应器)，但尺寸随种子细胞扩繁进程递增，或者可为随着种子细胞培养扩繁准备妥要转移到生产生物反应器而尺寸递增的混合培养系统(例如组织培养瓶至摇瓶至转瓶至搅拌釜生物反应器系统)。

通常控制体外环境以保持最适生长温度、溶解氧、二氧化碳、pH和重量摩尔渗透压浓度。许多细胞培养基配方是领域已知的，或者可容易地获自商用来源。本领域技术人员已知可通过将细胞接种到允许细胞在细胞培养期间生长的生长培养基中来产生条件细胞培养基。在细胞培养结束时或在培养期间的选定点，取出细胞，收获条件培养基。条件培养基可含有许多原始细胞培养生长培养基的成分，但还可含有细胞代谢物和由细胞分泌的其它蛋白质。分泌性蛋白可以是有生物活性的生长因子、细胞因子、蛋白酶和其它胞外蛋白质和肽。在许多实施方案中，本发明第一个方面的组合物包含Gro-α、I-309、IL-6、IL-8、IL-13、MIF、PAI-1、SDF-1和TGF-β蛋白的一种或多种，尤其包含TGF-β1。

按照本发明的第二个方面，提供用于制备条件细胞培养基的方法，所述方法包括：

a) 将真核细胞培养在具有有效支持细胞生长的组成的生长培养基中；

b) 将培养细胞与生长培养基分离；

c) 将培养细胞维持在具有适于维持细胞存活率但不支持实质性细胞生长的组成的基础培养基中。