[发明专利]脐带衬干细胞及其分离和培养方法和材料

权利要求书

1.一种用于自脐带分离脐带衬干细胞(ULSC)的方法，所述方法包括：

a)获得脐带的衬里，其中所述衬里基本上没有血液、静脉组织、和动脉组织；和

b)在存在低葡萄糖生长培养基的情况中将所述衬里的外植体在经纤连蛋白包被的固体基质上培养足以使所述ULSC粘着于所述经纤连蛋白包被的固体基质的时段，所述生长培养基包含15%胎牛血清、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的稳定化二肽、抗生素、和选自下组的生长因子：碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)、和表皮生长因子(EGF)。

2.权利要求1的方法，所述生长培养基进一步包含胰岛素、运铁蛋白、硒、和丙酮酸钠。

3.权利要求2的方法，所述生长培养基进一步包含腐胺。

4.权利要求3的方法，所述生长培养基包含bFGF、LIF、和EGF。

5.权利要求1的方法，其中所述抗生素是庆大霉素。

6.权利要求1的方法，其中所述抗生素是青霉素和链霉素。

7.权利要求1的方法，其中每个所述外植体的上表面与固体基质接触。

8.权利要求1的方法，所述方法进一步包括清洗粘着于所述经纤连蛋白包被的固体基质的所述细胞。

9.一种用于培养ULSC的组合物，所述组合物包含：

a)低葡萄糖生长培养基；

b)10%至20%血清；

c)0.7至1.5%L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的稳定化二肽；

d)1至100ng/mL选自下组的生长因子：碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)、和表皮生长因子(EGF)；和

e)1至3%抗生素。

10.权利要求9的组合物，其进一步包含：

f)0.1mg/mL至100mg/mL胰岛素；

g)0.1mg/mL至100mg/mL运铁蛋白；

h)0.1μg/mL至100μg/mL硒；和

i)0.5至1.5%丙酮酸钠。

11.权利要求10的组合物，其进一步包含0.05μg/mL至100μg/mL腐胺。

12.权利要求10的组合物，所述组合物包含15%血清；1%所述L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的稳定化二肽；10ng/mL bFGF、10ng/mL LIF；1%所述抗生素；10ng/mL胰岛素；0.55mg/mL运铁蛋白；和0.5μg/mL硒。

13.权利要求12的组合物，其进一步包含10μg/mL腐胺和10ng/mL EGF。

14.一种包含纯化的ULSC群和培养基的组合物，其中所述培养基包含低葡萄糖生长培养基；10%至20%血清；0.7至1.5%L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的稳定化二肽；1至100ng/mL选自下组的生长因子：bFGF、LIF、和EGF；和1至3%抗生素，其中所述ULSC在CD105、CD106、CD90、CD73、SSEA-4、和STRO-1方面呈阳性，而在CD45、CD34、CD19、和HLA-DR方面呈阴性。

15.权利要求14的组合物，其中所述培养基进一步包含0.1mg/mL至100mg/mL胰岛素；0.1mg/mL至100mg/mL运铁蛋白；0.1μg/mL至100μg/mL硒；和0.5至1.5%丙酮酸钠。

16.权利要求15的组合物，其中所述培养基进一步包含0.05μg/mL至100μg/mL腐胺和1ng/mL至100ng/mL表皮生长因子。

17.权利要求14的组合物，其中所述组合物进一步包含冷冻保护剂。

18.一种纯化的脐带衬干细胞群，其中所述细胞在CD105、CD106、CD90、CD73、SSEA-4、和STRO-1方面呈阳性，在CD45、CD34、CD19、和HLA-DR方面呈阴性，表达OCT4和Nanog，而且不表达Sox2。

19.权利要求18的纯化的ULSC群，其中所述细胞能够分化成中胚层谱系的细胞。

20.权利要求19的纯化的ULSC群，其中所述细胞能够分化成生脂细胞、骨原细胞、软骨形成、和生心细胞。