[发明专利]枯草蛋白酶变体

说明书

涉及序列表

本申请包含计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过提述并入本文。

技术领域

本发明涉及新型枯草杆菌酶变体，其相对于亲本枯草杆菌酶在一个或多个性质中呈现改变，所述性质包括：洗涤性能，热稳定性，储藏稳定性或催化活性。本发明的变体适用于例如清洁或去污剂组合物，如洗衣去污剂组合物和洗碟组合物，包括自动洗碟组合物。本发明还涉及编码所述变体的分离的DNA序列，表达载体，宿主细胞，和用于产生和使用本发明的变体的方法。此外，本发明涉及包含本发明变体的清洁和去污剂组合物。

背景技术

在去污剂工业中，酶应用于在洗涤制剂中已超过30年。用于此类制剂的酶包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、甘露糖苷酶以及其他酶，或其混合物。商业上，最重要的酶是蛋白酶。

越来越多数量的商业上使用的蛋白酶是天然出现的野生型蛋白酶的蛋白质工程变体，例如DURAZYM(R)、RELASE(R)和(Novozymes A/S)、AXAPEM(R)(Gist-Brocades N.V.)、PURAFECT(R)(Genencor International、Inc.)、MAXATASE^TM、MAXACAL^TM、MAXAPEM^TM、PROPERASE^TM、PURAFECT^TM、PURAFECT OxP^TM、FN2^TM、FN3^TM和FN4^TM(Genencor International、Inc.)。

此外，本领域中描述了许多变体，如WO 04/041979(NOVOZYMES A/S)中描述了相对于亲本枯草杆菌酶在例如洗涤性能、热稳定性、储藏稳定性或催化活性中呈现改变的枯草杆菌酶变体。所述变体适用于例如清洁或去污剂组合物。

已描述了许多有用的蛋白酶变体，其中许多在不同去污剂中提供了改善的活性、稳定性和溶解性。然而，多种因素使得蛋白酶的进一步改善是有利的。洗涤条件一直在改变，例如，考虑到温度和pH，以及在常规洗涤条件下许多污迹仍难以完全去除。因此，尽管在蛋白酶开发中进行了深入研究，仍有对于新型改善的蛋白酶的需要。

因此本发明的一个目标是提供相对于其亲本酶具有改善的性质的枯草杆菌酶的变体。

发明内容

本发明涉及亲本枯草杆菌蛋白酶的变体，所述亲本枯草杆菌蛋白酶可为如SEQ ID NO:1中所示的枯草杆菌蛋白酶。

在一个方面，本发明的变体与亲本枯草杆菌蛋白酶，如SEQ ID NO:1中所示的枯草杆菌蛋白酶相比具有至少一个改善的性质，其中所述改善的性质可为改善的洗涤性能，如改善的污迹去除能力，在硬表面洗涤中改善的洗涤性能，如改善的洗碟性能，改善的稳定性，如储藏或热稳定性，或者改善的催化活性。在本发明的一个方面，所述变体具有改善的蛋去除能力，如改善的将煮熟的蛋黄从硬表面去除的能力。

因此，本发明的一个方面涉及亲本枯草杆菌蛋白酶的变体，其包含取代9{R,K,H}、15{G，A,S,T,M}、68{G，A,S,T,M}、218{D,S,G，V}和245{R,K,H}，其中所述变体进一步包含至少一种下述的修饰：61{D,E}、62{D,E}、76{D,E}、*97aG、98{G，S}、99G、101G、120{V，Q,D}、131{T,S}、137H、194P、228V、230V、261D，其中所述位置对应于SEQ ID NO:2[BPN’]的成熟多肽的位置。

在一个方面，本发明的变体进一步包含取代G61E。

在一个方面，本发明的变体进一步包含取代A98S。

在一个方面，本发明的变体进一步包含取代S99G。

在一个方面，本发明的变体进一步包含下述取代：S9R、A15T、G61E、V68A、A98S、S99G、N218D和Q245R。

在一个方面，所述亲本枯草杆菌蛋白酶是包含与SEQ ID NO:1具有至少80%同一性的氨基酸序列的多肽。

在另一个方面，所述变体相对于亲本枯草杆菌蛋白酶具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质包括洗涤性能、稳定性、催化活性和洗碟性能。