[发明专利]生物化学血清标志物

说明书

发明领域

本发明属于诊断血清标志物的技术领域。

现有技术

BAG3(RefSeq：NP_004272；基因ID 9531)是74kDa的胞浆蛋白，尤其集中于粗面内质网中。最近已描述了40kD的胞浆形式与突触体相关(Brown等人.，2008)。并且，在大肠杆菌(E.coli)中表达了重组形式和一些缺失突变体(Rose等人2007(a))。

在人类中，bag3基因表达在肌细胞、少数其它正常细胞类型以及一些癌症(白血病和淋巴瘤、骨髓瘤、胰腺癌和甲状腺癌、黑素瘤、骨肉瘤等)中是组成型的(Romano等人，2003；Homma等人.2006；Chiappetta等人.，2007，Rosati等人.，2007)，并在多种细胞类型中响应于不同的应激原被诱导：暴露于高温的胰腺癌系(Liao等人.2001)，与重金属一起孵育或经受高温的HeLa细胞(Pagliuca等人.，2003)，用氧化应激诱导剂马来酸二乙酯处理的白细胞(Bonelli等人.，2004)，被光损伤的鼠类视网膜细胞(Chen等人.，2004)，用低强度超声处理的Molt-4细胞(人类白血病T细胞)(Tabuchi等人.，2006)，暴露于HIV-1病毒的人类小胶质细胞(Rosati等人.，2007a)。这些发现表明BAG3表达的调控是针对应激的细胞应答中的重要组成部分，并且与bag3基因的启动子中对在多种形式的细胞应激中激活的转录因子HSF(热休克因子)1反应的元件的存在相一致。HSF1活性的调节导致BAG3蛋白的细胞水平的显著降低，表明该调控子在bag3的表达中起重要作用(Franceschelli等人.，2008)。EGR1是参与bag3表达的调控的另一转录因子(Gentilella等人.，2008)。

BAG3影响原发癌细胞的存活的第一个证据来自对原发性白血病细胞的研究，所述原发性白血病细胞来自患有B细胞慢性淋巴样白血病(B-CLL)的24位患者和患有急性成淋巴细胞性白血病(ALL)的11位儿童：通过使用特异性反义寡脱氧核苷酸来降低BAG3水平导致了凋亡小体的100％以上的增加(p＜0.001)，还描述于EP 1465927A1和U.S.7,537,760B2中。因此与未处理的细胞和用相同的化疗药物处理的细胞相比较，这些细胞中的凋亡的百分比显著增高(Leone和Turco，2001，Romano等人.，2003a，2003b)。在正常白细胞中，证明该基因的过表达证明显著降低了凋亡应答(Bonelli等人.，2004)。

随后，人类甲状腺组织的分析显示正常组织和甲状腺肿样品检验为BAG3表达阴性，而癌症样品明显地检验为阳性，且在间变性肿瘤中观察到较高的BAG3表达。

在其他肿瘤中，诸如骨肉瘤和黑素瘤细胞，bag3特异性siRNA导致基底细胞的降低的存活，显示了与化疗剂的显著协同作用；小鼠中移植的人类黑素瘤细胞中的BAG3敲低显著降低了肿瘤生长，且提高了动物的存活(Ammirante等人.，出版中)。另一方面，bag3过表达导致了用化疗药物处理的或暴露于其他促凋亡刺激物的癌细胞的降低的凋亡(Rose等人.，2007(b))。

虽然已在不同的细胞系统中检测了胞浆BAG-3的存在，且发现其与肿瘤(例如，白血病或甲状腺癌)相关，以及更通常与细胞存活相关，但目前为止BAG3的可溶形式从未被描述，且其在血清中的存在从未与心区不适的状况相关联。

因此，本发明解决了鉴定BAG-3蛋白的新型分泌型可溶形式的问题，和其在人类和其他哺乳动物中产生的问题，其以令人惊奇的特异性和灵敏的方式与特定的疾病状况相关。

发明概述

本发明涉及用于检测未知生物样品中的可溶性BAG3蛋白的存在和/或浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

a.获得生物样品，其由血清或血浆组成，

b.确定所述生物样品中可溶性BAG3的存在或浓度，

c.将获自样品的值与参考值或获自生物参考样品的值相比较，

d.任选地，进一步确定相似值的组(和可能地其进一步分成具有统计学上差异的平均值的组)，

e.将可溶性BAG3的存在和/或水平与病理状况相关联，其中所述病症是心脏病或胰腺癌。

优选地，定量步骤(b)利用抗体通过ELISA来进行，所述抗体优选地是单克隆的。可选地，可溶性蛋白可分离自患者的血清。

所提出的测定方法允许心脏病患者组与健康人组的统计学显著的分离，优选地在相当的年龄的组中。还可将所述患有心脏病的患者分层到处于增高的风险(心力衰竭，HF)的患者的亚组中。