[发明专利]使用大鼠胚胎干细胞构建嵌合大鼠的方法

权利要求书

1. 一种制备嵌合胚胎的方法，所述方法包括下述步骤（a）和（b）：

（a）在ES细胞分化抑制剂的存在下使从雌性大鼠采集的受精宿主胚胎与大鼠多能干细胞接触的步骤，

（b）培养该与大鼠多能干细胞接触的宿主胚胎以形成嵌合胚胎的步骤。

2. 根据权利要求1所述的方法，其中通过将大鼠多能干细胞注射进宿主胚胎中来实现所述接触。

3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤（a）中，在ES细胞分化抑制剂和ROCK抑制剂的存在下，使所述大鼠多能干细胞与所述宿主胚胎接触。

4. 根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在与大鼠多能干细胞接触之前，在ES细胞分化抑制剂的存在下，预培养所述宿主胚胎。

5. 根据权利要求4所述的方法，其中在ES细胞分化抑制剂和ROCK抑制剂的存在下，进行所述预培养。

6. 根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在ES细胞分化抑制剂的存在下，进行步骤（b）中的培养。

7. 根据权利要求6所述的方法，其中在ES细胞分化抑制剂和ROCK抑制剂的存在下，进行步骤（b）中的培养。

8. 根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述ES细胞分化抑制剂由至少2种选自下述的药物组成：MEK抑制剂、GSK3抑制剂、TGFβ受体抑制剂和FGF受体抑制剂。

9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述ES细胞分化抑制剂由MEK抑制剂、GSK3抑制剂和TGFβ受体抑制剂组成。

10. 根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述多能干细胞是ES细胞。

11. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述大鼠多能干细胞是从这样的大鼠品系制备的多能干细胞：在步骤（a）中，在ES细胞分化抑制剂的非存在下与宿主胚胎接触时，所述大鼠品系不会生产传递种系的嵌合大鼠。

12. 根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述宿主胚胎源自这样的大鼠品系：在步骤（a）中，在ES细胞分化抑制剂的非存在下与大鼠多能干细胞接触时，所述大鼠品系不会生产传递种系的嵌合大鼠。

13. 一种制备嵌合大鼠的方法，所述方法包括：将根据权利要求1-12中任一项所述的方法制备的嵌合胚胎移植进假妊娠的雌性大鼠的子宫或输卵管中，以使后代大鼠生出。

14. 一种制备大鼠的方法，所述大鼠具有大鼠多能干细胞对整个身体的贡献，所述方法包括：使嵌合大鼠与异性大鼠交配。

15. 一种用于制备嵌合大鼠的培养基，所述培养基包含MEK抑制剂、GSK3抑制剂和TGFβ抑制剂。

16. 根据权利要求15所述的培养基，所述培养基进一步包含ROCK抑制剂。

17. 一种基因修饰大鼠，其具有经历双等位基因基因修饰大鼠ES细胞的贡献。

18. 一种制备基因修饰大鼠的方法，所述方法包括对大鼠ES细胞进行双等位基因基因修饰的步骤。