[发明专利]用于静脉采集和自体移植的改进的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2010年12月8日提交的序列号为No.61/267,640的美国临时申请的优先权，其全部内容通过引用合并到本文中。

技术领域

本发明一般地涉及如下领域：自体静脉、静脉移植、静脉保存、组织保存、内膜增生、血管痉挛、药物、设备以及血管生物学。

本发明在来自国立卫生研究院的资助No.2R01 HL070715的政府支持下进行。政府拥有本发明的某些权利。

背景技术

人大隐静脉(HSV)仍然是用于冠状和外周动脉旁路移植的最常用管道。HSV通常用直接手术暴露或者内窥镜静脉采集从腿采集。将分支结扎并且将静脉取出，并在植入之前置于“后台(back table)”。多数外科医生将HSV在室温下置于肝素化盐溶液中。在远端对静脉进行插管并且用肝素化盐溶液人工扩张(用注射器)。这允许对在采集过程中遗漏的分支进行鉴别和结扎。这种人工扩张引起静脉损伤。静脉还可用外科皮肤标记物进行标记，从而在植入期间优化其取向。

在全世界每年进行的超过1百万例冠状旁路手术中，10％至15％的冠状静脉移植物发生早期血栓性阻塞；还有10％至15％在之后的1年至5年由于内膜增生而发生阻塞，再有30％至40％在随后的5年至7年中由于内膜增生与进行性动脉粥样硬化的叠加而发生阻塞。12年后少于一半的静脉移植物仍有效(Motwani & Topol，1998)。静脉移植物阻塞引起心肌梗塞、肢体丧失以及死亡。

动脉旁路移植失败的首要原因是内膜增生(Clowes & Reidy，1991)。尽管血管介入近来有许多技术发展，但是内膜增生仍然是昂贵的、与疾病相关的并且未解决的问题。内膜增生由一连串事件介导，包括血管平滑肌增殖、迁移、表型转化以及细胞外基质产生(Allaire & Clowes，1997；Mosse等人，1985)。该过程引起血管腔的病理性变窄、移植物狭窄，并最终引起移植物衰竭(LoGerfo等人，1983)。

测试其抑制内膜增生之能力的许多药物在临床试验中都失败了。抗血栓剂和抗血小板剂(如华法林(warfarin)、氯吡格雷(clopidogrel)和阿司匹林(aspirin))对内膜增生没有或几乎没有作用(Kent & Liu，2004)。药物洗出式支架在预防冠状动脉血管成形术之后的再狭窄中已表现出有效；但是，还没有治疗被批准用于自体管道。使用E2F诱饵(与转录因子结合从而隔离这些蛋白质的DNA短序列)预防平滑肌增殖的以预防冠状和外周血管静脉移植物衰竭的两个大型临床试验的最初目的失败了。来自这些大型临床试验的数据指出，简单地限制增殖应答不足以预防内膜增生(Mann等人，1999；Alexander等人，2005)。因此，对于成功预防静脉移植的失败而言，需要靶向的是增殖以外的其他机制。

采集期间对静脉移植物的损伤引起血管痉挛和内膜增生，其导致移植物阻塞。因此，鉴定出防止在采集期间对移植物的损伤以及后续内膜增生的新的外科方法和治疗剂将是非常有益的。

发明内容

因此，根据本发明，提供在移植之前处理静脉外植体的方法，其包括(a)提供静脉外植体；(b)将所述静脉外植体在包含P2X₇受体拮抗剂的pH7.0至pH7.6的缓冲溶液中进行稳定化，以产生稳定化静脉外植体；以及(c)保持所述稳定化静脉外植体的功能活力。所述方法还可恢复在步骤(b)之前无活力的静脉外植体的功能活力。本文将平滑肌的功能活力(functional viability)定义为应答于去极化或激动剂而收缩的能力。对内皮细胞而言，活力定义为预收缩的血管应答于乙酰胆碱而舒张的能力。另外，所述缓冲溶液可进一步包含肝素。所述P2X₇受体拮抗剂可以是羊毛罂红/蓝染料#1(erioglaucine/Blue Dye#1)或亮蓝G(brilliant blue G)，或者它们的组合。所述缓冲溶液还可进一步包含磷酸盐缓冲液、MOPS、Hepes、Pipes、醋酸盐或勃脉力(Plasmalyte)。所述pH可以是7.35至7.45，或者7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6。

另外，所述缓冲溶液可进一步包含硫酸镁或汉克斯(Hanks’)平衡盐溶液。