[发明专利]检测微生物的方法和其套件

权利要求书

1.一种检测试验样本中微生物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)用酶底物培育所述试验样本以形成培育样本，其中所述酶底物包含酶可水解基团和荧光基团，其中所述试验样本中存在的微生物包括从所述荧光基团上水解所述可水解基团以形成荧光可检测产物的酶，并且其中所述荧光可检测产物具有酸性形式和碱性形式；

b)用波长为Exλiso的光激发所述荧光可检测产物历时足以使所述荧光可检测产物发射光的时间，其中Exλiso为所述荧光可检测产物的吸光度等吸光点；和

c)检测在波长Emλ1处发射的光。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述激发步骤和检测步骤之前未调整所述培育样本的pH。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，该方法还包括定量所述发射光以测定所述试验样本中存在的微生物的量。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，该方法还包括用波长为Exλ2的光激发所述荧光可检测产物历时足以使所述荧光可检测产物发射光的时间，其中Exλ2为所述荧光可检测产物的碱性形式的吸收最大值或所述荧光可检测产物的酸性形式的吸收最大值。

5.根据权利要求4所述的方法，该方法还包括测定在Exλiso处激发所致的发射与在Exλ2处激发所致的发射的比率。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述荧光可检测产物是香豆素衍生物。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述荧光可检测产物为4-甲基伞形酮并且Exλiso为约330nm。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述荧光可检测产物为3-氰基-7-羟基香豆素并且Exλiso为约375nm；所述荧光可检测产物为7-羟基香豆素-3-羧酸乙酯并且Exλiso为约370nm；或所述荧光可检测产物为7-羟基香豆素-3-羧酸甲酯并且Exλiso为约370nm。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述荧光可检测产物为3-(2-噻吩基)伞形酮并且Exλiso为约380nm。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中用所述酶底物培育所述试验样本的步骤包括将呈液体形式的所述样本添加到含有所述酶底物的脱水生长培养基中。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，该方法还包括形成所述被检测光的图像。

12.根据权利要求11所述的方法，该方法还包括从所述图像中计算菌落。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中Emλ1为在所述荧光可检测产物的最大荧光处的波长。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，该方法还包括定量在波长Emλ2附近发射的所述光，其中Emλ1和Emλ2为不同的波长。

15.根据权利要求14所述的方法，该方法还包括测定在波长Emλ1处发射的所述光与在波长Emλ2处发射的所述光的比率。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述波长Emλ2为所述等吸光发射点的波长。

17.根据权利要求14所述的方法，其中所述荧光可检测产物在所述波长Emλ2附近发射的光的量显著大于所述酶底物在所述波长Emλ2附近发射的任何光的量。