[发明专利]用于检测PNH II型白细胞的试剂和方法及其作为血栓形成病症的风险因子的鉴定

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2009年11月9日提交的题名为“用于检测PNH II型细胞的试剂和方法”的美国临时专利申请顺序号61/280,897的优先权和权益，其完整内容通过引用结合到本文中。

序列表

本申请包括通过EFS-Web提交的序列表，并且通过引用以其整体结合到本文中。2010年11月5日创建的所述ASCII副本命名为ALXN150WO1.txt，大小为26,000字节。

技术领域

本发明的领域是医学、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。

背景

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是罕见的衰弱性疾病，其特征尤其为血细胞生成异常、补体介导的血管内溶血和血栓形成倾向。参见例如Rosse和Nishimura (2003) Int J Hematol77(2):121-124和Brodsky (2008) Blood Rev22(2):65-74。PNH由X连锁磷脂酰肌醇聚糖互补型A类(phosphatidylinositol glycan complementation class A，PIGA)基因中的体细胞突变引起，该基因编码糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚生物合成最初步骤所必需的酶。参见Miyata等(1993) Science259:1318-1320和Bessler等(1994) EMBO J13:110-117。GPI锚(GPI anchor)将许多蛋白质与造血细胞表面连接。这些所谓的GPI锚定蛋白(GPI-anchored protein)尤其包括补体调节蛋白，例如CD55 (DAF)和CD59。根据发生在PIGA基因上的突变的类型，可导致GPI锚生物合成的部分丧失或完全丧失，其相当于细胞表面上GPI锚定蛋白(例如GPI锚定的CD55和CD59)存在的部分丧失或完全丧失。参见Rosse (1997) Medicine76:63-93。红细胞(RBC)表面上补体调节蛋白的部分或完全缺乏导致这些细胞对补体介导的裂解的敏感性升高和受累患者中PNH的相关症状。参见Nicholson-Weller等(1983) Proc Natl Acad Sci USA80:5066-5070和Yamashina等(1990) N Engl J Med323:1184-1189。

传统上，PNH的诊断和PNH患者的监测包括采用流式细胞术，对RBC和粒细胞表面上的CD55和CD59表达进行分析。Sutherland等(2009) Am J Clin Pathol132:564-572。最近研发的PNH诊断方法采用了重组的非裂解形式的细菌蛋白质气单胞菌溶素，其与造血细胞表面上的GPI锚结合。参见授予Buckley和Brodsky的美国专利号6,593,095。传统的和新的方法两者皆可供医学从业人员将PNH患者的RBC或白细胞分成以下三类之一：I型细胞，其具有正常或几乎正常的细胞表面表达的GPI锚定蛋白；PNH III型细胞，其没有或完全缺乏细胞表面表达的GPI锚定蛋白；和PNH II型细胞，其具有中等水平的细胞表面表达的GPI锚定蛋白。Brodsky等(2000) Am J Clin Pathol114:459-466。由于白细胞谱系中的II型细胞难以与正常I型白细胞相区别开来，因此未对这些细胞进行表征。

概述