[发明专利]提高基因表达的系统和保持有该系统的载体

权利要求书

1.一种基因表达用盒，该表达用盒含有DNA构建体，并在该DNA构建体的下游含有增强子或第2启动子，所述DNA构建体在第1启动子下游含有所要表达的基因和polyA附加序列。

2.如权利要求1所述的表达用盒，其中，在所连接的增强子或第2启动子的下游不具有其它基因表达用结构，具有所要表达的基因被夹在一个第1启动子与一个增强子之间、或者被夹在一个第1启动子与一个第2启动子之间的结构。

3.如权利要求1所述的表达用盒，其中，启动子为选自由CMV i启动子、SV40启动子、hTERT启动子、β肌动蛋白启动子和CAG启动子组成的组中的启动子。

4.如权利要求1～3的任一项所述的表达用盒，其中，增强子为选自由CMV增强子、SV40增强子和hTERT增强子组成的组中的至少1种增强子。

5.如权利要求1～4的任一项所述的表达用盒，其在DNA构建体的上游进一步连接有1～4个CMV增强子，所述DNA构建体在启动子的下游含有编码所要表达的蛋白质的DNA和polyA附加序列。

6.如权利要求1～5的任一项所述的表达用盒，其进一步含有下述元件(i)～(iii)中的至少任意之一：

(i)连接在紧靠编码外源蛋白质的DNA的上游的RU5’；

(ii)连接在紧靠增强子和/或启动子的上游的UAS；和

(iii)连接在表达用盒的最上游的SV40-ori。

7.如权利要求1～6的任一项所述的表达用盒，其中，所要表达的基因为可用于疾病治疗的治疗用基因，或者为可用于药物、诊断试剂或试剂的蛋白质的基因。

8.如权利要求7所述的表达用盒，其中，治疗用基因是REIC/Dkk-3基因，该REIC/Dkk-3基因为可用于肿瘤的治疗的抑癌基因。

9.如权利要求1所述的外源基因表达用盒，其具有构建体No.2(图8)、No.4(图10)、No.6(图12)、No.8(图14)、No.10(图16)、No.12(图18)和No.14(图20)所示的结构。

10.如权利要求1所述的外源基因表达用盒，其具有构建体No.15(图16)、No.16(图37)、No.17(图49)、No.20(图57)和No.21(图58)所示的结构。

11.一种载体，其含有权利要求1～10的任一项所述的外源基因表达用盒。

12.如权利要求11所述的载体，其为腺病毒载体或腺相关病毒载体。

13.一种宿主细胞，其含有权利要求11或12所述的载体。

14.一种疾病检测或治疗用制剂，其含有权利要求11或12所述的载体。

15.一种使所要表达的基因进行表达的方法，其使用权利要求1～10的任一项所述的表达用盒、或者权利要求11或12所述的载体。

16.一种所要表达的基因所编码的蛋白质的制造方法，其包括如下步骤：将权利要求1～10的任一项所述的表达用盒、或者权利要求11或12所述的载体导入至细胞中，对该细胞进行培养。