[发明专利]提高基因表达的系统和保持有该系统的载体

说明书

技术领域

本发明涉及使用启动子、增强子等来提高基因表达的方法；以及含有启动子、增强子等的提高基因表达的表达用盒。

背景技术

以往，为了提高基因表达效率，开发出了CMV启动子、CAG启动子等各种基因表达启动子(专利文献1～4)。但是，在生物技术领域中，即使使用这些现有技术，根据细胞种类或基因种类的不同，通常也会出现几乎不发生基因表达、或表达蛋白质量极少这样的问题。并且，该问题在将基因表达用于诊断或治疗的医疗的进步中成为较大的障碍。

专利文献1：日本专利公报第2814433号公报

专利文献2：日本专利公报第2814434号公报

专利文献3：美国专利第5168062号说明书

专利文献4：美国专利第5385839号说明书

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用启动子、增强子等来提高基因表达的方法；以及一种含有启动子、增强子等的可提高基因表达的表达用盒。

在利用了启动子的基因表达系统中，本发明人尝试开发出一种可以以更高的效率进行基因表达的新系统，对各种基于基因的启动子、增强子的组合所得到的启动子活性进行了比较、研究。结果发现，通过使用基因表达用盒(其在DNA构建体的下游连接有增强子或第2启动子，所述DNA构建体在第1启动子的下游含有所要表达的基因和polyA附加序列)，将所要表达的基因夹在2个启动子之间、或夹在启动子与增强子之间，可使基因高效表达。本发明人进一步发现，通过使上述表达用盒中含有polyA附加序列、RU5’、UAS、SV40-ori等元件，能够进一步高效地进行基因的表达。

通过本发明的“提高基因表达的系统和保持有该系统的载体”的开发，可针对大致全部的细胞、基因使蛋白质表达得到强力提高。

即，本发明如下。

[1]一种基因表达用盒，该表达用盒含有DNA构建体，并在该DNA构建体的下游含有增强子或第2启动子，所述DNA构建体在第1启动子下游含有所要表达的基因和polyA附加序列。

[2]如[1]所述的表达用盒，其中，在所连接的增强子或第2启动子的下游不具有其它基因表达用机构，具有所要表达的基因被夹在一个第1启动子与一个增强子之间、或者被夹在一个第1启动子与一个第2启动子之间的结构。

[3]如[1]所述的表达用盒，其中，启动子为选自由CMV i启动子、SV40启动子、hTERT启动子、β肌动蛋白启动子和CAG启动子组成的组中的启动子。

[4]如[1]～[3]的任一项所述的表达用盒，其中，增强子为选自由CMV增强子、SV40增强子和hTERT增强子组成的组中的至少1种增强子。

[5]如[1]～[4]的任一项所述的表达用盒，其在DNA构建体的上游进一步连接有1～4个CMV增强子，所述DNA构建体在启动子的下游含有编码所要表达的蛋白质的DNA和polyA附加序列。

[6]如[1]～[5]的任一项所述的表达用盒，其进一步含有下述元件的至少任意之一：

(i)连接在紧靠编码外源蛋白质的DNA的上游的RU5’；

(ii)连接在紧靠增强子和/或启动子的上游的UAS；和

(iii)连接在表达用盒的最上游的SV40-ori。

[7]如[1]～[6]的任一项所述的表达用盒，其中，所要表达的基因为可用于疾病治疗的治疗用基因，或者为可用于药物、诊断试剂或试剂的蛋白质的基因。

[8]如[7]所述的表达用盒，其中，治疗用基因是可用于肿瘤的治疗的抑癌基因。

[9]如[8]所述的表达用盒，其中，抑癌基因为REIC/Dkk-3基因。

[10]如[9]所述的表达用盒，其中，所要表达的基因为REIC/Dkk-3基因的片段DNA。

[11]如[10]所述的表达用盒，其中，REIC/Dkk-3基因的片段DNA为编码序列编号18的氨基酸序列的第1～78氨基酸的DNA。

[12]如[1]所述的外源基因表达用盒，其具有构建体No.2(图8)、No.4(图10)、No.6(图12)、No.8(图14)、No.10(图16)、No.12(图18)和No.14(图20)所示的结构。

[13]如[1]所述的外源基因表达用盒，其具有构建体No.15(图16)、No.16(图37)、No.17(图49)、No.20(图57)和No.21(图58)所示的结构。