[发明专利]对双链DNA中的目标序列进行扩增的方法

权利要求书

1.一种对由第1单链DNA和第2单链DNA构成的双链DNA中的双链目标序列进行扩增的方法，其中，

所述双链目标序列由单链目标序列和互补性单链目标序列构成，

所述第1单链DNA由3’末端-第1非扩增序列-所述单链目标序列-第2非扩增序列-5’末端构成，

所述第2单链DNA由5’末端-第3非扩增序列-所述互补性单链目标序列-第4非扩增序列-3’末端构成，

所述互补性单链目标序列、第3非扩增序列和第4非扩增序列分别与所述单链目标序列、所述第1非扩增序列和第2非扩增序列互补，

所述方法是将DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、所述双链DNA、正向引物、反向引物和第1阻碍核酸混合，使用聚合酶链反应对所述双链目标序列进行扩增的工序A，

其中，所述正向引物和所述反向引物均作为用于利用所述DNA聚合酶的延伸反应的起点发挥作用，

所述正向引物与所述单链目标序列所含的3’末端侧的序列的部分互补，

所述反向引物与所述互补性单链目标序列所含的3’末端侧部分的序列互补，

所述第1阻碍核酸不会作为用于利用所述DNA聚合酶的延伸反应的起点发挥作用，

所述第1阻碍核酸与所述第3非扩增序列的一部分互补。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第1阻碍核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氢、磷酸基、氨基、生物素基、巯基或它们的衍生物取代或修饰的DNA构成。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第1阻碍核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氢、磷酸基、氨基、生物素基、巯基或它们的衍生物取代或修饰的锁定核酸构成。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第1阻碍核酸由肽核酸构成。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述工序A中还混合第2阻碍核酸，所述第2阻碍核酸不作为用于利用所述DNA聚合酶的延伸反应的起点发挥作用，且与所述第2非扩增序列的一部分互补。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第2阻碍核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氢、磷酸基、氨基、生物素基、巯基或它们的衍生物取代或修饰的DNA构成。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第2阻碍核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氢、磷酸基、氨基、生物素基、巯基或它们的衍生物取代或修饰的锁定核酸构成。

8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第2阻碍核酸由肽核酸构成。