[发明专利]阿尔茨海默病的诊断方法

说明书

发明领域

本发明涉及使用定量阿尔茨海默病周围生物标记的离体诊断方法。

发明背景

阿尔茨海默病是神经变性疾病，影响全世界约2千4百万人。该疾病表征是由大脑皮层和大脑某些皮质下区域的神经元和突触缺失造成的认知和行为紊乱

所述疾病可以在最终诊断前的很多年即已开始。在早期，短期记忆丧失是最常见症状。后来，症状包括混乱，愤怒，情绪不稳，语言衰退，长期失忆，感觉和身体机能普遍下降。

阿尔茨海默病是老年人中最常见的痴呆类型并且影响所有痴呆患者的几乎一半。相应的，年龄增长是疾病的主要危险因子。65岁的人中，2-3%显示疾病征兆，而85岁的人中，25-50%有阿尔茨海默病症状，并且甚至更多人没有特征症状但有疾病的一些病理特点。世界卫生组织预测阿尔茨海默病和其他痴呆的全球总伤残调整生命年（DALY）在2005年超过1千1百万，预计每年有3.4%的增加。阿尔茨海默病目前没有已知治愈法，并且可用的治疗提供相对较小症状益处且性质是缓解性。

抑郁是阿尔茨海默病常见早期症状，并且认为归因于单胺氧化酶（MAO）上调等因子。所述酶有两个同种型，MAO-A和MAO-B。发现两者都遍及中枢神经系统（CNS）细胞，其中，它们的功能是使包括苯乙胺和多巴胺在内的单胺能神经递质失活。MAO-B在血小板中也丰富。阿尔茨海默病的开始和进展与淀粉样斑块和神经纤维缠结的发展有关。淀粉样斑块（也称为“老年斑”）包括β淀粉样蛋白的致密不溶性沉淀，所述β淀粉样蛋白来自跨膜蛋白淀粉样前体蛋白（APP）。

APP水解后，β淀粉样蛋白在细胞外聚集，形成斑块。神经纤维缠结由于tau的过度磷酸化形成，所述tau是CNS中丰富的微管相关蛋白。多个过度磷酸化tau分子成为缠结并且在神经细胞体内形成块。这些神经纤维缠结造成微管崩解，导致神经元转运系统的瓦解。

阿尔茨海默病通常从病史，亲戚观察和临床观察上进行临床诊断。然而，阿尔茨海默病特征性神经和神经心理学特性，例如淀粉样斑块和神经纤维缠结的存在经常在死后才能确定。

大部分阿尔茨海默病的示例不显示家族遗传，但是至少80%散发性阿尔茨海默病例涉及遗传风险因子。载脂蛋白E（ApoE）基因的ε4等位基因的遗传被认为是多至50%晚发型散发阿尔茨海默病例发展的风险因子。

谷胱甘肽S-转移酶Ω-1（GSTO-1）是催化还原型谷胱甘肽（GSH）与多种带亲电中心的疏水底物连接的谷胱甘肽S-转移酶家族成员。编码GSTO-1的基因已知存在不同遗传同种型。这些同种型关联阿尔茨海默病和帕金森病的发病年龄（AAO）（Li，Y等，Hum Mol Genet.（2003）12（24）:3259-67）。Li和同事描述GSTO-1h SNP 7-1（rs4825，一种核苷酸）与阿尔茨海默病AAO延迟6.8年（+/-4.41）和帕金森病AAO延迟8.6年相关（Li，Y等，Neurobiol Aging（2006）27（8）:1087-93）。

当治疗化合物有最大潜在效果时，神经疾病的诊断标记在病程早期诊断中特别重要。然而，难于准确诊断。可用的早期神经疾病的诊断标记很少，并且可用的那些标记依赖于样品材料分析（如脑脊液），得到这些材料困难并且令人疼痛。

因此，需要确定使用易得到患者样品周围可用的阿尔茨海默病生物标记的新诊断方法，从而有助于简单和准确诊断。

发明内容

本发明的第一个方面提供帮助患者中阿尔茨海默病诊断的离体方法，包括：

（i）测定选自单胺氧化酶B，凝集因子XIIIa，总原肌球蛋白，WD重复蛋白1载脂蛋白E4的患者血小板样品中至少4种血小板蛋白的表达水平；和

（ii）将（i）的结果与对照值作比较，

其中，结果高于对照值指示阿尔茨海默病。

本发明的第二个方面针对一种或多种表3或表4中确定的蛋白以使一种或多种本发明第一方面所述诊断方法包括的血小板蛋白标准化。

本发明的第三个方面提供的固体支持物包括选自其上固定的单胺氧化酶B，凝集因子XIIIa，总原肌球蛋白，WD重复蛋白1和ApoE4的至少4种血小板蛋白的一种或多种配体。

附图说明

图1显示使用模型1，2，3和4单独算法的决策过程。

图2a和2b显示使用模型1的各发现组的ROC曲线和散点图。图2c和2d显示使用模型1的各验证组的ROC曲线和散点图；

图3a和3b显示使用模型2的各发现组的ROC曲线和散点图。图3c和3d显示使用模型2的各验证组的ROC曲线和散点图；