[发明专利]弗林蛋白酶敲减和GM-CSF增强的（FANG）癌症疫苗

权利要求书

1.一种表达载体，其包括：

bishRNA^{弗林蛋白酶}/GMCSF表达载体质粒，其中所述载体质粒包括：

可操作地连接于启动子的第一核酸插入物，其中所述第一插入物编码粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的cDNA；

可操作地连接于所述启动子的第二核酸插入物，其中所述第二插入物编码一个或多个双功能短发夹RNA，所述短发夹RNA能够杂交至编码弗林蛋白酶的mRNA转录物区域，从而通过RNA干扰抑制弗林蛋白酶表达，其中所述shRNA为弗林蛋白酶表达的剪切依赖性的和非剪切依赖性的抑制剂，其与弗林蛋白酶mRNA的第300-318、731-740、1967-1991、2425-2444、2827-2851或2834-2852位核酸杂交并以弗林蛋白酶mRNA的第300-318、731-740、1967-1991、2425-2444、2827-2851或2834-2852位核酸为靶点。

2.如权利要求1所述的表达载体，其中所述GM-CSF为人的。

3.如权利要求1所述的表达载体，其中在第一和第二核酸插入物之间，所述载体质粒还包括编码小核糖核酸病毒2A核糖体跳跃肽的核苷酸序列。

4.如权利要求1所述的表达载体，其中所述启动子为CMV哺乳动物启动子。

5.如权利要求4所述的表达载体，其中所述CMV哺乳动物启动子包含CMV IE 5’UTR增强子序列和CMV IE内含子A。

6.如权利要求1所述的表达载体，其中shRNA所靶向的区域为弗林蛋白酶mRNA转录物的3’UTR区域序列。

7.如权利要求1所述的表达载体，其中shRNA所靶向的区域为弗林蛋白酶mRNA转录物的编码区域。