[发明专利]脂质体的两相制备方法及其在制造诊断试剂中的应用

权利要求书

1.一种脂质体的两相制备方法，在所述方法的过程中，混合包含天然和合成磷脂混合物的非极性有机相和与所述非极性有机相不混溶的极性水（缓冲液）相，并产生具有50至100nm粒径的脂质体乳剂，其特征在于：用一种简单的机械方法生产所述脂质体乳剂，其中，用溶于所述非极性有机相中并呈现正曲率或零曲率的0.5至1.5g/ml浓度的脂质分子的单独混合物产生完全包围所述有机相的单层或双层脂质体膜的结构，所述脂质分子为例如卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酸、溶血磷脂酰胆碱和更少量的天然来源的其它磷脂，这样，以这种方式制备的具有独特结构的所述脂质体乳剂的所述膜表面优选适于锚定活性成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：将2∶1比例的氯仿-甲醇混合物用作非极性有机相。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：在所述非极性有机相中，为生产呈现正曲率或零曲率的脂质分子的所述单独混合物，优选提供55℃的温度和pH=2的环境。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：在所述极性水相中，用有机化合物，优选0.025M三(羟甲基)甲基甘氨酸，提供所述缓冲效果。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：用5M NaOH将所述极性水（缓冲液）相的pH值调节在pH=6和pH=7之间、优选pH=6.6，并以0.05M的浓度补充抗菌NaN₃防腐剂。

6.如权利要求1至5的任一项所述的方法，其特征在于：在制备所述具有独特结构的脂质体乳剂的过程中，将较小体积的所述非极性有机相加入到较大体积的所述极性水（缓冲液）相中，所述较大体积为所述较小体积的5至50倍大，最优选20倍。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：在室温(25℃)下将相简单摇动到一起，所述相为在所述极性水（缓冲液）相下分层的所述非极性有机相。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：由于搅拌元件的旋转运动，较大体积的所述相在室温被带入涡旋运动，然后将较小体积的所述相注入、喷射或最优选滴入所述涡旋中。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：通过离心旋转所述混合容器将较大体积的所述相在室温带入涡旋运动，然后将较小体积的所述相注入、喷射或最优选滴入所述涡旋。

10.如权利要求7至9的任一项所述的方法，其特征在于：通过沉降、过滤或离心去除与不与水混溶的所述制造的成品的组分。

11.制备体外凝固诊断凝血酶原时间(PT)的试剂的方法，所述试剂的一种成分为用根据权利要求1至10的任一项所述的方法制造的脂质体，其特征在于：在制备所述PT试剂的过程中，不使用任何洗涤剂，将蛋白类型的活性组分组织因子锚定到所述具有独特结构的脂质体的所述膜表面。

12.如权利要求1至11的任一项所述的方法，其特征在于：所述具有独特结构的脂质体组分在预备生产步骤中生产。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于：所述活性成分为从天然来源分离的组织因子。

14.如权利要求12所述的方法，其特征在于：所述活性成分为通过发酵生产的重组组织因子。

15.如权利要求13或14所述的方法，其特征在于：所述天然或重组组织因子（活性成分）优选使用0.5至1.0μΜ的浓度。

16.如权利要求1至15的任一项所述的方法，其特征在于：包含所述具有独特结构的脂质体乳剂的所述溶液与所述天然或重组组织因子（活性成分）混合到一起，并静置优选10分钟。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于：所述脂质体乳剂与所述组织因子以2∶1的比例混合。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于：通过用合适组成的缓冲液稀释来调节通过混合具有独特结构的脂质体乳剂和组织因子并静置而生产的产品的最终血液凝固特性。