[发明专利]一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶及其应用

权利要求书

1.一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：所述的脂肪酶由以下的方法获得：

(1)获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒；

(2)分别扩增青霉的脂肪酶基因PEL、构巢曲霉的强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子TtrpC，得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒；

(3)将该PEL基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得了含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体；

(4)将含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体转化工程农杆菌，利用农杆菌介导转化法将PEL基因表达盒转化到青霉菌株中，获得高表达脂肪酶的青霉基因工程菌；

(5)将所述的青霉基因工程菌以菌丝体或孢子悬液接入种子培养基，在25-35℃、200-300rpm条件下培养24小时后，以5％-20％接种量转入发酵培养基，在25-35℃、150-300rpm条件下发酵2天后，经分离纯化得到所述的脂肪酶。

2.根据权利要求1所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：在步骤(1)中获得潮霉素抗性表达盒的方法包括PCR技术或限制性酶切技术。

3.根据权利要求1所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：在步骤(2)中获得青霉的脂肪酶基因PEL、构巢曲霉的强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子TtrpC的方法包括PCR扩增或限制酶克隆或化学合成技术克隆。 

4.根据权利要求1所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：步骤(4)中所述的青霉菌为扩展青霉菌。

5.根据权利要求1所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：所述的目标质粒为下列之一：

pCAMBIA1300、pCAMBIA2300、pCAMBIA3300或pHB。

6.根据权利要求1所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：步骤(5)中所述培养基的成分如下：

(1)种子培养基(％)：黄豆饼粉4，玉米淀粉0.8，Na NO3 0.3，Na2HPO40.2，K2SO4 0.25，MgSO4 0.03，FeSO4 0.003；

(2)发酵培养基(％)：黄豆饼粉6，玉米淀粉1，NaNO3 0.4，Na2HPO4 0.2，K2SO4 0.3，MgSO4 0.035，FeSO4 0.02，CaCO3 0.5，Na2CO3 0.02。

7.权利要求1所述的脂肪酶在降低动物体内胆固醇、血脂水平中的应用。

8.根据权利要求7所述的脂肪酶作为添加剂在动物饲料中的应用。