[发明专利]一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶及其应用

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种能够有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

脂肪酶，又称甘油三酯水解酶，是一类能催化长链脂肪酸甘油酯水解的酶，也可以催化该反应的逆反应，许多微生物分泌的脂肪酶还可以催化酯化反应、酯交换反应、醇解反应、酸解反应以及氨解反应等。

家禽胰腺中脂肪酶的活性在出生时很低，出生后随着日龄的升高而逐渐增加，肉鸡出生时对动物脂肪的消化率很差，在1-8周龄逐渐增加，肉鸡对植物油的消化率较动物油高，但在仔鸡出生后两周内的消化率较低。家禽在刚出生时胰腺分泌的脂肪酶不足成为限制脂肪消化利用的一个因素，因此，在玉米-豆粕型日粮中添加脂肪酶可以提高脂肪的消化率，从而影响动物的生长。在饲料中添加脂肪酶，能够提高日粮的脂肪消化率和能量利用率，从而改善畜禽生产性能。

发明内容

本发明申请即是针对现有技术中的不足之处，提供一种能够有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶及其应用。

具体来说，本发明申请所述的一种有效降低动物体内胆固醇、血脂水平的脂肪酶，其特征在于：所述的脂肪酶由以下的方法获得：

1、获得潮霉素抗性表达盒并克隆至目标质粒上，获得潮霉素抗性的重组质粒；

2、分别扩增青霉的脂肪酶基因(PEL)、构巢曲霉的强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子(PgpdA)和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子(TtrpC)，得到有强启动子驱动的PEL基因表达盒；

3、将该PEL基因表达盒插入到潮霉素抗性的重组质粒中，获得了含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体；

4、将含潮霉素筛选标记的PEL基因超表达载体转化工程农杆菌，利用农杆菌介导转化法将PEL基因表达盒转化到青霉菌株中，获得高表达脂肪酶的青霉基因工程菌；

5、将所述的青霉基因工程菌以菌丝体或孢子悬液接入种子培养基，在25-35℃、200-300rpm条件下培养24小时后，以5％-20％接种量转入发酵培养基，在25-35℃、150-300rpm条件下发酵2天后，经分离纯化得到所述的脂肪酶。

其中，获得潮霉素抗性表达盒的方法包括PCR技术或限制性酶切技术。

获得青霉的脂肪酶基因(PEL)、构巢曲霉的强启动子3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子(PgpdA)和构巢曲霉色氨酸合成酶终止子(TtrpC)的方法包括PCR扩增或限制酶克隆或化学合成技术克隆。

其中所述的被转化的青霉菌为扩展青霉菌。

所述的目标质粒为下列之一：

pCAMBIA1300、pCAMBIA2300、pCAMBIA3300或pHB。

其中，所以培养基的成分如下：

1、种子培养基(％)：黄豆饼粉4，玉米淀粉0.8，Na NO₃ 0.3，Na₂HPO₄ 0.2，K₂SO₄ 0.25，MgSO₄ 0.03，FeSO₄ 0.003；

2、发酵培养基(％)：黄豆饼粉6，玉米淀粉1，NaNO₃ 0.4，Na₂HPO₄ 0.2，K₂SO₄ 0.3，MgSO₄ 0.035，FeSO₄ 0.02，CaCO₃ 0.5，Na₂CO₃ 0.02。

本发明申请还要求包括该脂肪酶在降低动物体内胆固醇、血脂水平中的应用。例如可以将该脂肪酶作为动物饲料添加剂添加到动物的日常饲料中，改善动物的肉质。

附图说明

图1为PV2+载体的结构示意图；

图2为pCAMBIA2300载体的结构示意图；

图3为pCAMBIA2302载体的结构示意图；

图4为PMD18-T::gpdA-Lip-TtrpC载体的结构示意图；

图5为pCHAMBIA2302::PgpdA-Lip-TtrpC最终载体的结构示意图；

图6为超表达载体pCHAMBIA2302::PgpdA-PEL-TtrpC的构建路线图；

图7为构建的超表达载体pCHAMBIA2302::PgpdA-PEL-TtrpC的PCR鉴定图谱；

其中，1-6：独立的农杆菌转化子、+：阳性对照、-：阴性对照、M：DL-2000Marker；