[发明专利]一项铁线莲阿拉贝拉组织培养快繁技术

说明书

一、技术领域

本发明涉及铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术。

二、背景技术

铁线莲‘阿拉贝拉’(Clematis‘Arabella’)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L.)，是铁线莲Clematis‘Integrifolia’与Clematis‘Lanujinosa’的杂交品种，原产自英国。该品种植物花型、花序多样，花色丰富，花期长，园艺用途广泛，观赏价值颇高。‘阿拉贝拉’作为垂直绿化材料，不仅应用于园林领域，而且广泛用于盆栽，切花等。

铁线莲‘阿拉贝拉’观赏价值较高，应用前景广，但却因其种子繁殖困难，推广速度慢。目前我国还没有研究出它的快繁技术，该品种仍需从国外大量进口，限制了‘阿拉贝拉’在我国的推广和应用，同时也消耗掉我国大量外汇。所以，研究‘阿拉贝拉’快繁技术极其必要。

铁线莲品种丰富，但至今对于铁线莲的组织培养研究并不多，泽仁旺姆利用甘青铁线莲的种子长出的幼苗进行了不定芽和不定根的生成；张启香找出了‘Multi-Blue’的最佳外植体为茎尖；而张涛诱导出重瓣铁线莲的愈伤，但没有诱导不定芽。本技术利用铁线莲‘阿拉贝拉’当年新生枝条带芽茎段，进行组织培养，诱导腋芽的发生，促进不定芽的生成，再诱导其生根。通过人工配制不同营养成分和激素调控，在保留‘阿拉贝拉’母体花色艳丽，花型大等特点的基础上，形成成千上万小植株，短时间内获得大量试管苗，获得的幼苗存可放在人工控制的培养室内，可实现一年四季工厂化无性系育苗。因此利用组织培养技术繁殖铁线莲‘阿拉贝拉’，不仅为推广铁线莲‘阿拉贝拉’提供了一个快速的途径，也为其工厂化生产提供帮助，应用前景远大。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种可以实现快速和大量繁殖铁线莲‘阿拉贝拉’的组织培养技术。

本发明提供的铁线莲‘阿拉贝拉’组织培养快繁技术，包括以下几个步骤：

1、腋芽诱导：

将当年新生枝条带芽茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有1/4MS、1/2MS、MS常规基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升、吲哚丁酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升。培养20 天后，待培养物诱导出芽原基后，进入以下第2步。

2、不定芽增殖：

将第1步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-1.5毫克/升、吲哚丁酸0.05-0.15毫克/升、蔗糖20-40克/升。培养20天左右，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入以下第3步。

3、生根：

将第2步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养基含有1/4MS，1/2MS，MS常规基本培养基、萘乙酸0.05毫克/升，培养20天左右，待小苗根部长出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基含有1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-1.0毫克/升或吲哚丁酸0.03-1.0毫克/升、蔗糖30克/升。35天左右，小苗长出4-5根主根时，进入以下第4步。

4、移栽与炼苗：

先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移栽到珍珠岩与泥炭以1∶3混合的基质内，放入温室大棚进一步炼苗10-15天。其间需要喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养。

本发明利用带腋芽的茎段做外植体进行直接器官的发生，大大提高了组织培养的快繁速率，同时用基本培养基添加微量激素进行腋芽的诱导，能够快速诱导腋芽，并促使其伸长。腋芽诱导后，不宜在原培养基上长期培养，否则诱导出的芽容易伸长生长，因此要转接MS+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升培养基上，以利于不定芽的分化和伸长。生根阶段，本发明采用了先诱导再促进伸长的方法，首先，把伸长到适合常规生根高度的小苗，转移到1/2MS+萘乙酸0.03毫克/升培养基中，诱导不定根的生成，再转移到促进根伸长1/2MS+萘乙酸0.04毫克/升培养基中，此方法大大提高了根诱导和伸长的速率。

因此采用此发明的培养基有如下优点：腋芽诱导启动快，芽分化系数高，苗伸长快、生长一致且健壮，生根率高、根长且壮，生长周期短，基本无畸形苗。

四、附图说明

图12，4-D和IBA诱导产生的腋芽

图26-BA和IBA激素处理后的增殖芽

图3NAA诱导产生的根

五、具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例