[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型毒种的制备和保存方法有效
| 申请号： | 201110001417.6 | 申请日： | 2011-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN102154221A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 刘长辉;赵亚荣;王忠山;王贵华 | 申请（专利权）人： | 北京大北农科技集团股份有限公司;福州大北农生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100080 北京市海淀区中*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 圆环 病毒 型毒种 制备 保存 方法 | ||
1.一种猪圆环病毒II型(Porcine circovirus type 2)毒种的制备和保存方法，其特征在于步骤如下：
(1)接种用细胞的制备
PK15细胞按常规条件培养24小时后，80-90％细胞融合时作为接种用细胞；
(2)病毒的接种培养
取接种用细胞，弃去生长培养基，以毒种：接种用细胞为1-10％(v/v)或病毒滴度为103.0-106.0TCID50/mL的比例接入猪圆环病毒II型毒种，37℃吸附1小时后加入维持液进行培养；24小时后用300mM的D-氨基葡萄糖于37℃处理20分钟，经无菌pH7.4的PBS两次洗涤后加入维持液进行培养；
(3)传代
取培养后的细胞，弃去维持液，经无菌pH7.4的PBS两次洗涤后，加入细胞分散液，将细胞分散成3-6×106/mL，定量分装细胞瓶中，37℃培养48-96小时；
(4)连续传代
重复步骤(3)，传代3-6次，得含毒种PK15细胞；
(5)保存
含毒种PK15细胞置于液氮内进行保存。
2.如权利要求1所述的猪圆环病毒II型(Porcine circovirus type 2)毒种的制备和保存方法，其特征在于病毒的接种培养中，以毒种：接种用细胞为5％(v/v)的比例接入猪圆环病毒II型毒种。
3.如权利要求1所述的猪圆环病毒II型(Porcine circovirus type 2)毒种的制备和保存方法，其特征在于传代培养72h，连续传代5次。
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