[发明专利]一种测定乳制品中1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及属于分析化学技术领域，具体涉及一种测定乳制品中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法。

背景技术

1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)是2008年卫生部新增加的一种新资源食品，它是类似于母乳脂肪的一种甘油三酯。母乳脂肪中约70％的棕榈酸连结在甘油三酯的sn-2位上，而sn-1，3位主要是不饱和脂肪酸。棕榈酸是人体重要的产能脂肪酸，它在甘油三酯上的位置对其消化和吸收有很大的影响，sn-2位上的棕榈酸能以sn-2位单甘脂的形式被吸收，而sn-1，3位上的棕榈酸则易与矿物质(钙、镁等)形成不溶性的盐流失掉，同时也造成矿物质和能量的流失。因此，1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯作为一种新型的食品添加剂，具有促进机体对能量吸收，促进钙、镁等骨骼矿物质吸收，缓解婴幼儿便秘等功能。目前，1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的研究在国外已逐步从实验室阶段转向工业化生产和应用，它主要应用于婴幼儿配方食品中。

目前国内所用的婴幼儿奶粉中脂肪的检测方法主要是测定奶粉中各种游离脂肪酸的含量。该方法主要是通过前处理提取脂肪后，再通过皂化反应把样品中的脂肪甲酯化，最后气相色谱外标法对各脂肪酸甲酯定量，所以，该方法只能够测定脂肪酸的量，不能用于甘油三酯的测定。

目前用于检测OPO的方法主要是测定2位棕榈酸占总棕榈酸的比例。该方法是利用胰脂肪酶去除甘油三酯sn-1，3位的脂肪酸，再用薄层层析法分离得到sn-2单甘脂，衍生成为甲酯后GC分析，谱图面积归一法得到sn-2位棕榈酸的比例。总样品衍生生成脂肪酸甲酯，GC谱图得到总棕榈酸的比例。使用公式：

即可得到sn-2位棕榈酸占总棕榈酸的比例，但该方法不能准确测定OPO的添加量。

因此，寻找一种直接测定乳制品中的OPO含量及其它甘油三酯的方法是必须的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种直接测定乳制品中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种测定乳制品中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量的方法，该方法包括如下步骤：

(1)按照常规方法提取乳制品中的脂肪；

(2)将步骤(1)提取的脂肪溶于溶于二氯甲烷中，再通过高效液相色谱法测定1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量；

其中，高效液相色谱法检测条件为：

色谱柱：正相C18色谱柱，其固定相为十八烷基硅烷键合硅胶吸附相；

流动相：A相为二氯甲烷，B相为丙酮或乙腈；t₀时刻，X为10～25％；从t₀时刻至t₁时刻，X线性提高，直至t₁时刻X达到26～37％；从t₁时刻至t₂时刻，X继续线性提高，直至t₂时刻X达到38～60％；从t₂时刻至t₃时刻，X线性降低，直至t₃时刻X达到10～25％；其中，t₀、t₁、t₂、t₃为液相检测总时间中的时刻，t₃为样品停止检测时刻，t₀＜t₁＜t₂＜t₃，取值范围为t₀＝0min，10min≤t₁≤20min，21min≤t₂≤30min，29min≤t₃≤35min；X为A相体积与A、B两相总体积的体积百分比；上述梯度洗脱的示意图见图4，但本发明方法不局限于图4所显示的具体洗脱方式。普通高效液相检测仪都可设定洗脱程序，完成上述梯度洗脱过程。

流动相流速：0.3～1.3mL/min，优选0.8mL/min；

检测仪：蒸发光散射检测器(ELSD)或示差折光检测器(RI)；

色谱柱温：18～30℃，优选21℃；

进样体积：10～20μk，优选20μL。

其中，所述的乳制品为初乳、婴幼儿食品、奶粉、还原乳或含乳饮料。

步骤(1)中，提取乳制品中的脂肪可按常规方法处理，优选按照如下步骤提取脂肪，具体参考GB5413.27-2010：