[发明专利]一种阿维菌素产生菌及其制备方法

权利要求书

1.阿维菌素产生菌(streptomyces avermitilis)，保藏名称为FT26-9，保藏编号CGMCC No.4341，保藏日期2010年11月12日。

2.一种阿维菌素产生菌的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

a、紫外线复合氯化锂诱变处理：

(1)孢子悬浮液制备：将普通阿维菌素产生菌的孢子制成孢子悬液，调整孢子浓度为10⁶个/毫升，于波长253.7nm，进行紫外线诱变；

(2)诱变处理：将紫外线诱变后孢子悬液系列稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，取0.1毫升各浓度的稀释液，涂在含氯化锂的平板培养基上，28±0.5℃培养7-9天；

b、诱变株的筛选：

将诱变后培养的单菌落转接至斜面培养基中，并对应点种到另一培养皿培养基上，28±0.5℃培养7天后，取单菌落菌块，用甲醇浸泡18～24小时，震荡后，测定各菌株浸取液的效价，留取10％的高效价菌株，用摇瓶发酵法进行复筛，最终挑选出最后效价高的菌株作为下一诱变剂诱变处理的出发菌株I；

c、亚硝基胍诱变、筛选：

(1)孢子悬浮液制备：在含有磷酸缓冲液的新鲜试管斜面内，将上述出发菌株I的孢子制成孢子悬液，调整孢子浓度为10⁶个/毫升，过滤，除去大部分菌丝及培养基；

(2)诱变处理：将上述孢子悬浮液加入亚硝基胍母液，使亚硝基胍含量为1.0mg/ml，充分混匀后，于28±0.5℃，220rpm振荡处理40-60分钟；诱变处理完毕后，终止亚硝基胍诱变，分别吸取0.1ml不同浓度的稀释液涂平板，28±0.5℃培养7-10天；

(3)筛选：按照b步方法对诱变株进行筛选，终筛挑选出最后效价高的菌株作为下一诱变剂诱变处理的出发菌株II；

d、硫酸二乙酯诱变、筛选：

(1)孢子悬浮液制备：在含有磷酸缓冲液的新鲜试管斜面内，用上述出发菌株II的孢子制成孢子悬液，调整孢子浓度为10⁶个/毫升，过滤，除去大部分菌丝及培养基；

(2)诱变处理：将上述孢子悬浮液与硫酸二乙酯充分混合，使硫酸二乙酯含量为1mg/100ml，于28±0.5℃，震荡处理，诱变处理完毕后，终止硫代硫酸钠诱变；分别吸取0.1ml不同浓度的稀释液涂平板，28±0.5℃培养7-10天；

(3)筛选：按照b步方法对诱变株进行筛选，终筛挑选出最后效价高的菌株作为下一诱变剂诱变处理的出发菌株III；

e、羟胺诱变、筛选

(1)孢子悬液的制备：取15毫升已灭菌的ph为7.0磷酸缓冲液，倒入一支培养好的III菌株试管斜面内，用无菌接种针轻轻将孢子刮下做成孢子悬液，用血球计数板计数，调整孢子浓度为10⁶个/毫升。过滤，除去大部分菌丝及培养基；

(2)诱变处理：将制备好的孢子悬液进行梯度稀释10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，取0.1ml各浓度稀释液，涂在已制备好的含有羟胺的平板上，28±0.5℃培养7-9天；

(3)筛选：按照b步方法对诱变株进行筛选，终筛挑选出最后效价高的菌株作为下一诱变剂诱变处理的出发菌株IV；

f、5-溴尿嘧啶复合紫外线诱变、筛选：

(1)孢子悬浮液制备：将出发菌株IV孢子刮下制成孢子悬液，调整孢子浓度为10⁶个/ml，过滤，除去大部分菌丝及培养基；

(2)诱变处理：孢子悬液中加入5-溴尿嘧啶，使5-溴尿嘧啶含量为1.0-1.5mg/ml，于28±0.5℃，转速220rpm条件下处理5-8小时；将诱变处理过的孢子悬液紫外线照射35-60秒；

(3)分别吸取处理液进行梯度稀释，吸取0.1ml各浓度稀释液涂平板，在28±0.5℃培养7-9天；

(4)筛选：按照b步方法对诱变株进行筛选，最终获得FT26-9菌株。