[发明专利]一种丙型肝炎病毒的非结构蛋白与GB病毒B的嵌合病毒

说明书

技术领域

本发明涉及病毒、组合物及其制备或纯化领域，特别涉及以引入外来基因材料修饰的病毒领域。 

背景技术

据调查全球有1亿7千万人感染了丙型肝炎病毒(HCV)，并且每年至少有3-4百万新增感染者。我国自然人群HCV感染率在3％左右，属高流行国家。研究证实，70％以上的HCV急性感染转化为持续性感染，其中10％-20％进一步发展为诸如肝硬化等复合慢性肝病，1-5％的病人在二三十年后发展为肝癌。目前丙型肝炎预防无疫苗可利用，抗病毒治疗效果亦不佳。由于丙型肝炎病毒只能感染人类和黑猩猩，没有适当的丙型肝炎病毒感染小动物模型，极大地限制了丙型肝炎病毒抗病毒研究进展。 

丙型肝炎病毒是一种黄病毒科肝病毒属的病毒，其基因组由结构(核心，囊膜)和非结构(蛋白酶，螺旋酶，酶辅助因子)蛋白及非编码区组成。虽然非结构蛋白(NS)不是病毒粒子的构成部分，但在病毒复制中起到非常重要的作用。NS2和NS3氨基端组成NS2-3蛋白酶，在NS2/3区催化分裂。NS3是一种具有双重功效的分子，在氨基端有丝氨酸类型的蛋白酶可催化分裂，在羧基端剩余部分具有三磷酸核苷酶(NTPase)和螺旋酶(helicase)活性，参与丙型肝炎病毒基因的翻译和复制。近年，丙型肝炎病毒全基因组感染性克隆的细胞培养成功，使丙型肝炎病毒细胞培养有了很大进展。然而，自然感染(野生)毒株尚不能细胞培养，特别是丙型肝炎病毒只能感染人类和黑猩猩，因此尚无有效的小型灵长类动物感染模型模拟真实的丙型肝炎病毒感染，依旧极大地限制着丙型肝炎病毒免疫研究。 

现有技术中，利用嵌合病毒的研究已见于HCV/HIV、HCV/VSV、HCV/YFV、HCV/CSFV、HCV/BVDV和HCV/PV。这些构建的HCV嵌合病毒或称伪病毒(pseudotype virus)主要用于丙型肝炎病毒蛋白与细胞的相互作用、中和抗体测定，以及基因调控等研究。由于这些骨架病毒均无嗜肝细胞性，故不能用于丙型肝炎疫苗免疫防治研究。 

GB病毒B(GBV-B)是一种最近似丙型肝炎病毒，同属黄病毒科肝病毒属的病毒。与丙型肝炎病毒不同，GB病毒B可在小型灵长类动物狨猴common marmoset(Callithrix jacchuejacchus)和小娟猴(Tamarin，Saguinus spp)体内复制并导致急或慢性肝炎。但是GB病毒B仍然与丙型肝炎病毒存在差异，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的感染和免疫状态，因此，如果以GB病毒B基因组为骨架，以丙型肝炎病毒的功能基因取代GB病毒B的相应功能区，构建HCV/GBV-B嵌合病毒，则是利用感染模型研究丙型肝炎病毒免疫的理想方案。然而，由于将丙型肝炎病毒的完整功能蛋白基因替换到GB病毒B基因组中存在一定的困难，并且构建的含完整功能蛋白的嵌合病毒是否能够感染小型灵长类动物存在不确定性和风险性，因此，目前利用HCV/GBV-B嵌合病毒的研究仅见于将较小基因片段的丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替换到GB病毒B基因组中，这些只包含了丙型肝炎病毒很短基因片 段的嵌合病毒只能用于研究这些特定基因片段的功能，无法表明丙型肝炎病毒与宿主之间的相互作用，不能完全模拟丙型肝炎病毒在灵长类动物体内的免疫反应。上述将丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替换到GB病毒B基因组中的方案，参见Rijnbrand，R.et al.Achimeric GB virus B with 5’nontranslated RNA sequence from hepatitis C virus causeshepatitis in tamarins.Hepatology.41，986-994(2005)、Takikawa，S.et al.Functionalanalyses of GB virus B p13 protein：Development of a recombinant GB virus B hepatitisvirus with a p7 protein.Proc Natl Acad Sci USA.103，3345-3350(2006)、Haqshenas，G.，Dong，X.，Netter，H.，Torresi，J.&Gowans，E.J.A chimeric GB virus B encodingthe hepatitis C virus hypervariable region 1 is infectious in vivo.J.Gen.Virol.88，895-902(2007).和Griffin，S.et al.Chimeric GB virus B genomes containinghepatitis C virus p7 are infectious in vivo.J.Hepatol.49，908-915(2008)等文献的报导。