[发明专利]一种可溶性人重组MICA蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种MICA蛋白的制备方法，尤其是一种可溶性人重组MICA蛋白的制备方法。

背景技术

移植物发生免疫排斥反应是自器官移植出现后就一直困扰国内外学者的最大瓶颈，虽然移植免疫机制的研究在不断深入，大量新免疫抑制药物在不断涌现，但是移植后移植物发生免疫排斥机率仍然较高，而使用免疫抑制剂却费用昂贵，且长期应用免疫抑制剂还会大大增加后发生肿瘤、感染的机会，因此对移植免疫的研究依然是最关键的课题之一。

一直以来，学界都将研究重点放在了经典的主要组织相容性复合体(major histocompability complex，MHC)方面，即MHC-I和MHC-II上，并建立了经典的免疫排斥理论：即同种异基因个体间移植后，受者T细胞通过直接或间接两条途径，在协同刺激因子的作用下获得激活，从而发动一系列免疫应答，且认为体液免疫是超急性排斥反应和加速急性排斥反应的主导机制；而急性排斥反应和慢性排斥反应主要由细胞免疫反应机制参与。因此以往在同种异体器官移植前往往需要进行供受体间的经典MHC交叉配型（主要是HLA-A，HLA-B和HLA-DR）试验，国内外的临床实验也证明了移植前经典MHC交叉配型阴性的受者和交叉配型阳性的受者相比，前者在移植物免疫排斥发生率上明显低于后者。但是后来有研究人员发现一些即使是经典MHC交叉配型一致的受者在移植后，也不能完全避免急性或慢性免疫排斥反应的发生，在另外一些术前同样经过经典HLA交叉配型，且抗HLA抗体检测阴性却依然发生了急性或慢性排斥反应的受体体内，发现了大量激活的NK细胞和T细胞，说明细胞免疫反应机制的存在。说明除了经典的MHC分子，还存在其他引起细胞免疫反应的未知因素。

近些年来，国外一些学者在对MHC的外延性研究中发现了与经典MHC基因有高度同源性的非经典MHC-I类基因，其中以MICA基因(major histocompatibility complex class I chain-related gene A，又称为MHC- I 链相关基因A)最为引人注目（Giurisato E, Cella M, Takai T, et al. PI3-kinase activation is required to form the NKG2D immunological synapse. Mol Cell Biol, 2007, 27:8583-99）。MICA基因与经典HLA-I类基因具有较高的同源性，但功能不同。MICA基因位于HLA-B位点着丝粒端约46kb处，全长11722bp，比经典HLA-I类基因长。其编码产物是一条高度糖基化的蛋白质分子，结构与经典的HLA-I类分子a链相似，包括3个胞外结构域：al、a2和a3，以及跨膜区和胞内区，构型很稳定（见图1和图2）。MICA基因呈高度多态性，存在于人、灵长类、狗、羊、牛和猪中，主要表达于内皮细胞、树突状细胞、成纤维细胞、上皮细胞以及多种肿瘤细胞，如肝癌、直肠癌、胶质瘤细胞表面。MICA蛋白 的功能是随着其受体NKG2D及与NKG2D组成复合体DAP10的发现之后得到了解的。NKG2D是Ⅱ型C凝集素样蛋白，表达于所有NK细胞，γδT细胞，CD8⁺ T细胞表面，MICA蛋白与NKG2D／DAP10结合后，可以将活化信号传递给NK细胞、γδT细胞等[Giurisato E, Cella M, Takai T, et al.PI3-kinase activation is required to form the NKG2D immunological synapse. Mol Cell Biol, 2007, 27:8583-99]，可能有助于促进它们对表达MICA 蛋白的细胞的杀伤，参与免疫应答。

近来美国学者在一些肾移植术前和术后患者的血清中均发现了MICA抗体，随后又在出现排斥反应被切除的移植肾中发现了更高滴度的该抗体，提示此类患者在肾移植前体内存在同种异型MICA抗原的预致敏，且MICA抗体在肾移植后发生的排斥反应中可能起着重要作用，但其参与免疫反应的机制仍然不清楚。另外，国外目前对MICA基因及其表达产物MICA蛋白的研究还主要集中在肾移植领域方面，而对于其他器官移植，如MICA蛋白对肝脏移植后免疫排斥反应的影响及其作用机理研究依然较少。