[发明专利]一种Viili胞外多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于乳制品深加工领域，涉及一种胞外多糖的提取方法，尤其一种Viili胞外多糖及其制备方法。

背景技术

胞外多糖(Exopolysaccharides，EPS)是微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的粘液或荚膜多糖，易与菌体分离。微生物多糖不仅可以作为胶凝剂、保鲜剂、乳化剂、成膜剂等添加剂用于食品和制药行业来改变产品的黏度和硬度，而且还具有抗氧化、抗衰老、增强免疫以及降胆固醇等多种功能。因此，这些多糖成为具有特定生理活性物质的重要来源，开发和利用这些具有特定生理功能的胞外多糖已经成为药物研究和功能食品生产的前沿领域之

Viili是一种起源于北欧的传统发酵乳制品，又叫Vilia，Filia，是芬兰的一种民俗食品，质地黏稠，与我国传统的酸乳相似，呈丝状，味美，微甜，风味独特。Viili中含有细菌、酵母菌和丝状真菌等多种微生物。Viili独特的黏稠性被认为是由其中乳酸菌产生的胞外多糖所致，据报道，Viili胞外多糖能降低小鼠血液中胆固醇的水平，也具有由B淋巴细胞有丝分裂活动刺激所介导的抗癌特性。此外，Viili胞外多糖还具有促进益生菌与肠黏膜的吸附等重要生理活性。

目前，有关胞外多糖的专利报道多集中在真菌多糖和部分细菌多糖，没有关于Viili酸乳中胞外多糖的专利。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种单糖种类多、纯度高、易溶于水的Viili胞外多糖及其制备方法。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种Viili中胞外多糖的制备方法，方法步骤如下：

(1)发酵：纯牛乳灭菌，按1％～3％接种量接种Viili，将接种后的牛乳置于25-35℃培养箱中，培养15～17h后取出，置于4℃冰箱中4～8h，得到发酵乳；

(2)等电点法除酪蛋白：用饱和NaOH溶液调发酵乳的pH至8.0，离心、取上清液，再用HCl调节上清液pH至4.6，再离心，再调上清液的pH至7.5；

(3)酶解：在上述上清液中加入1/6总体积的胰酶液，胰酶液浓度为2-5g/L，水浴下酶解2-3h，3000r/min，离心15min，得到酶解液；

(4)脱蛋白：以酶解液∶氯仿∶正丁醇＝30∶8∶1进行蛋白质沉淀1-3h，离心，去除沉淀，得到的滤液中无游离蛋白；

(5)乙醇沉淀：将步骤(4)所得滤液预冷，加入5～6倍体积的预冷无水乙醇，置于1-5℃冰箱中沉淀40-55h，本步骤中多糖呈絮状沉淀析出，取沉淀；

(6)透析：将经过步骤(5)得到的沉淀用截留14kDa分子量的透析袋在超纯水中透析25-30h，得沉淀物，在低于50℃下进行真空干燥，得到Viili胞外粗多糖。

而且，所述Viili胞外粗多糖还经过以下步骤：

离子交换柱层析：将Viili胞外粗多糖用5mL蒸馏水溶解，上DEAE纤维素柱，每管4mL分管收集，洗脱步骤如下：

①使用去离子水洗脱DEAE纤维素柱，得到一种胞外多糖组分V-I，出现在第6～40管中，最高吸收峰OD值达到0.76，当洗脱超过2h之后没有明显的多糖成分被洗脱下来；

②使用0.1mol/L的NaHCO₃洗脱DEAE纤维素柱，得到两种多糖组分V-II、V-III，分别出现在第6～10管、第21～40管中，其最高峰OD值分别为0.45和0.12，当洗脱超过2h之后没有明显的多糖成分被洗脱下来；

③使用0.1mol/L的NaOH洗脱DEAE纤维素柱，得到一种胞外多糖组分V-IV，出现在第20～32管中，其最高峰OD值为0.07，当洗脱超过2h后没有明显的多糖成分被洗脱下来。

而且，所述Viili胞外粗多糖还经过以下步骤：

凝胶过滤层析：取含糖量最高的多糖V-I组分20mg用适量水溶解，用0.45μm的微孔滤膜过滤，上Sephendex G-50柱，用去离子水平衡48h，恒流泵控制流速9mL/h，用同一去离子水洗脱，每管3mL分部收集，硫酸-苯酚法检测，收集洗脱峰部洗脱液，经真空浓缩、冷冻干燥获得白色粉状的胞外多糖纯品V-1，纯度大于99％。

一种Viili胞外多糖，其特征在于：由上述Viili胞外多糖的制备方法制备得到。

而且，所述Viili胞外多糖由鼠李糖、阿拉伯、木糖、苷露糖、葡萄糖、半乳糖组成，其摩尔比为：7.41∶15∶8.85∶1∶3.25∶1.25。

而且，所述Viili胞外多糖的单糖残基以吡喃环和呋喃环的形式存在。