[发明专利]一种CAMV35S基因检测用引物、相应的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种CAMV35S基因检测用引物，其特征在于由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1~4所示。

2.一种CAMV35S基因检测用引物，其特征在于由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:5~8所示。

3.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1或2所述CAMV35S基因检测用引物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒由权利要求1所述CAMV35S基因检测用引物、Bst DNA 聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液组成；其中，所述反应液的配方为：每1L反应液中含有1.6~2mmol dNTP、20~25mmol Tris-HCl、10~12.5mmol氯化钾、10~12.5mmol硫酸铵、8~10mmol硫酸镁、1~1.25ml TritonX-100、0.8~1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各1.6~2mol和外引物 F3/B3各0.2~0.25mol；所述阳性对照为CAMV35S基因DNA片段。

5.根据曲安咯要求4所述的试剂盒，其特征在于所述显色液为SYBR Green I或EvaGreen。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述每1L反应液中含有2mmol dNTP、25mmol Tris-HCl、12.5mmol氯化钾、12.5mmol硫酸铵、10mmol硫酸镁、1.25ml TritonX-100、1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各2mol和外引物 F3/B3各0.25mol。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述稳定液位石蜡油。

8.利用权利要求3所述试剂盒检测CAMV35S基因的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）待测样品DNA的制备；

（2）在反应管中加入反应液38~40体积%，Bst DNA聚合酶0.9~1.8体积%，稳定液52~54.5体积%，样品模板DNA 4.5~9体积%，恒温反应；

（3）在上述反应管和阳性对照组中分别加入显色液，混匀，样品组显色与对照组相同则为阳性，否则为阴性。

9.根据权利要求8所述的检测CAMV35S基因的方法，其特征在于步骤（2）中，所述恒温反应的温度为63~65℃，反应时间为45~90min。