[发明专利]一种快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，包括一个对离体的淡水鱼样品处理的步骤、一个提取样品DNA的步骤、一个对样品的DNA进行PCR扩增的步骤和一个对PCR扩增的产物进行电泳观察的步骤；其特征在于：在所述的对离体的淡水鱼样品处理的步骤中，将待检测的样品加入缓冲液用玻璃株匀浆打碎，然后吸取匀浆液滴在FTA卡上，在所述的提取样品DNA的步骤中，将FTA卡自然干燥，然后将FTA卡用FTA卡洗液洗涤，在所述的对样品的DNA进行PCR扩增的步骤中，将洗涤后的FTA卡晾干后放入PCR反应管中进行PCR扩增，扩增采用的上游引物为CGAGGGTCGGCTTATAAAC，下游引物为GGAAAGTTAAGCACCGACC，然后对扩增的产物进行电泳并观察。

2.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：还包括一个对阳性的对照品进行DNA提取和PCR扩增的步骤，所述的阳性的对照品为华支睾吸虫成虫或者囊蚴。

3.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：在所述的对PCR扩增的产物进行电泳观察的步骤中，将待检测的样品的电泳条带和阳性对照的电泳条带进行比较，如果扩增产物的长度为315bp，则表示样品中含有华支睾吸虫囊蚴，反之，则表示样品中不含有华支睾吸虫囊蚴。

4.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：在所述的对样品的DNA进行PCR扩增的步骤中，将FTA卡裁剪后放入PCR反应管中进行PCR扩增。

5.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：所述的FTA卡洗液为由Tris-HCl和EDTA组成的水溶液，所述的Tris-HCl在FTA卡洗液中的浓度为0.01mol/L，所述的EDTA在FTA卡洗液中的浓度为0.1mmol/L，pH为8.0。

6.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：所述的PCR扩增的反应体系为：2×Taq PCR Master Mix 50μL，1％BSA 4μL，10μmol/L上游引物和下游引物分别为3μL，ddH₂O 40μL。

7.如权利要求1所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的方法，其特征在于：PCR反应条件是94℃预变性3min；94℃变性1min，62℃退火1min，72℃延伸1min，40个循环；72℃延伸10min。

8.一种快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中含有检测引物CS1和检测引物CS2，所述的CS1的序列为CGAGGGTCGGCTTATAAAC，所述的CS2的序列为GGAAAGTTAAGCACCGACC。

9.如权利要求8所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的试剂盒，其特征在于：还含有阳性对照品，所述的阳性对照品为华支睾吸虫成虫或者囊蚴的样品。

10.如权利要求8所述的快速检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中还含有PCR反应液。