[发明专利]一株在高盐环境中除去黄曲霉毒素B1的嗜盐四联球菌的使用

说明书

技术领域

本发明涉及一株在高盐环境中除去AFB₁的嗜盐四联球菌，已经于2010年4月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，保藏编号为CGMCC No.3792，属于微生物领域。

背景技术

黄曲霉毒素是由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）等产生的次级代谢产物，黄曲霉毒素尤其是黄曲霉毒素B₁（AFB₁）具有较强的致癌作用，因此，各国在农产品、各种食品等原料与产品中的含量均有严格的限制。

自1960年发现黄曲霉毒素以来，世界各国科学家们均试图寻求预防和除去黄曲霉毒素的有效途径。目前除去黄曲霉毒素的方法主要有五类：①碱处理方法。Mukendi报道了使用亚硫酸钠、硫酸氢钠、氢氧化钠、氨等化学试剂对黄曲霉毒素去毒的研究，并分析了影响这些化合物去毒效果的各种因素。该类方法适合应用于含水量较高的青绿、青贮饲料以及液态粮油，去毒效率高但不适合籽实、饼粕等固体饲料原料，而且处理后原料残留有大量氨。由于该方法的设备投资大，成本高，已逐渐被淘汰。②氧化处理法。常用的氧化剂有次氯酸钠、臭氧、过氧化氢、氯气等。该方法具有较好的去毒效果，但是该方法的缺点在于处理效果不稳定，饲料中维生素等营养成分损失严重，处理成本较高。③吸附剂吸附毒素。常用的吸附剂包括酵母细胞壁、硅铝酸盐、活性炭等。但吸附剂不能解除黄曲霉毒素的毒性，它还可能同时吸附食品中的营养成分而降低营养物质的利用率，而且被吸附的毒素有可能在动物胃肠道中重新释放。④抗氧化剂处理。这类抗氧化剂包括2-叔丁基对甲酚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)、异硫氰酸苄酯、2,2,4-三甲基-6-乙氧喹啉等。其机理是抗氧化剂能促进大鼠体内α-谷胱甘肽转移酶-YC2 亚基的表达，有效地抑制了AFB₁与机体DNA 的结合。但是抗氧化剂的去毒作用有限，不能完全消除黄曲霉毒素中毒症，而且BHT 等抗氧化剂浓度均超过常规使用量的30 倍以上才显示较好的去毒效果，这样对动物具有一定毒害作用。⑤高温处理法。破坏AFB₁需要268℃以上的温度，该方法能耗高且对食品中的营养成分破坏大，实际应用很少。

朱新贵等在几种食品微生物除去黄曲霉毒素作用的研究（食品科学.2001，22：65～68）文中报道了乳酸菌、醋酸菌、面包酵母、酿酒酵母、米曲霉、枯草杆菌等对AFB₁具有除去作用。在30℃，添加AFB₁使其初始含量是10μg/ml，接种乳酸菌、醋酸菌和枯草芽孢杆菌的菌悬液，培养48h后，除去AFB₁的作用明显。乳酸菌和枯草杆菌的除去作用分别达到82％和86％，培养60h后，其除去率分别达到88％和89％。但面包酵母和酿酒酵母的除去作用则不明显。

本发明的目的就是采用一株能在高盐环境中生长繁殖，且具有除去AFB₁能力的嗜盐四联球菌达到去除酱油、豆酱和豆瓣酱等生产过程中污染的AFB₁的目的。本发明使用的嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus，保藏编号：CGMCC No.3792），属于益生菌类，安全可靠，含盐浓度在6% -20% 范围生长繁殖良好，能有效除去被污染的酱油、豆酱等发酵醪中的AFB₁。

发明内容

为了减少AFB₁对人和动物的危害，减少真菌毒素对食品的污染，保证食品安全，本文通过对该菌株生物修复AFB₁，应用于生产实际中，AFB₁的去除率达到41.76%。

本发明嗜盐四联球菌的形态学特征为在固体培养基上菌落表面光滑，湿润，边缘整齐，中央隆起，直径约为1mm，乳白色。液体培养无菌膜，菌液浑浊且有少量沉淀，革兰氏染色阴性，细胞呈球形，二个平面分裂形成四联状。

本发明所要解决的技术问题是提供一株除去AFB₁效果较好的嗜盐四联球菌及其在AFB₁污染样品上的应用。

本发明要求嗜盐四联球菌（T. halophilus）的菌龄处于为对数初期，菌体浓度在使用对象中的初始浓度为5.0×10⁶ ～1.5×10⁷ cfu/g(ml)，以湿基计。