[发明专利]一种定量评估乳腺癌远期复发风险的试剂盒

权利要求书

1.一种定量评估乳腺癌远期复发风险的试剂盒，其特征在于：由21对引物、21条特异性taqman荧光探针、10×RT-PCR缓冲液、2.5mM dNTP混合液、逆转录酶、DNA聚合酶、10×PCR缓冲液和RNA酶抑制剂组成；

所述21对引物序列分别如下：

(1)CCNB1引物对：包括反向引物CCNB1R和正向引物CCNB1F；所述CCNB1R序列为：GCAGCATCTTCTTGGGCACA；所述CCNB1F序列为AGGTTGTTGCAGGAGACCATG

(2)Ki-67引物对：包括反向引物Ki-67R和正向引物Ki-67F；所述Ki-67R序列为：CAACTCTTCCACTGGGACGATCCG；所述Ki-67F序列为：CGGCGGACTTTGGGTGCGAC

(3)MYBL2引物对：包括反向引物MYBL2R和MYBL2F；所述MYBL2R序列为：CCTTCCTTTTGATGGTAGAGTTCCAGT；所述MYBL2F序列为：TGGGCCGAGATCGCCAAG

(4)STK15引物对：包括反向引物STK15R和正向引物STK15F；所述STK15R序列为：GACCTTCAATCATTTCAGGG；所述STK15F序列为：CTCCATCTTCCAGGAGGACC

(5)Survivin引物对：包括反向引物SURVR和正向引物SURVF；所述SURVR序列为：AGCTGTCAGCTCTAGCAAAAGGG；所述SURVF序列为：TGCTGTTTTGATTCCCGGGC

(6)Bcl2引物对：包括反向引物Bcl2R和正向引物Bcl2F；所述Bcl2R：TTTCCTATGATTTAAGGGCATTTT；所述Bcl2F：CTTCAGATGGACCTAGTACCCACTG

(7)SCUBE2引物对：包括反向引物CEGP1R和正向引物CEGP1F；CEGP1R序列为：GACTACAGCCGTGATCCTTATTC；CEGP1F序列为：GAGTGACAATCAGCACACCTGCT

(8)ER引物对：包括反向引物EstR1R和正向引物EstR1F；所述EstR1R序列为，CTAGTGGGCGCATGTAGGC；所述EstR1F序列为，GAACGTGGTGCCCCTCTATG

(9)PR引物对：包括反向引物PRR和正向引物PRF；所述PRR，GTTGTGCTGCCCTTCCATTG；所述PRF，GAAGCATCAGGCTGTCATTA

(10)HER2引物对：包括反向引物HER2R和正向引物HER2F；所述HER2R序列为：TCACCTCTCGCAAGTGCTCC；所述HER2F序列为：TGTGAGAAGTGCAGCAAGCC

(11)GRB7引物对：包括反向引物GRB7R和正向引物GRB7F；所述GRB7R序列为，CATGGCCACCAGGGTATTAT；所述GRB7F序列为，TCGCCATCTGCATCCATCTT

(12)Cathepsin L2引物对：包括反向引物CTSL2R和正向引物CTSL2F；所述CTSL2R序列为，GCCACCATTGCAGCCCTGA；所述CTSL2F序列为，ACTTGTCTCACTGAGCGAGCA

(13)Stromolysin 3引物对：包括反向引物STMY3R和正向引物STMY3F；所述STMY3R序列为，ATTTACAATGGCTTTGGAGGATA；所述STMY3F序列为，GGCCCTGGAGGCTGCAACAT

(14)CD68引物对：包括反向引物CD68R和正向引物CD68F；所述CD68R序列为，CCTCTCCTCCACCCTGGGT；所述CD68F序列为，CAATGGTTCCCAGCCCTG

(15)BAG1引物对：包括反向引物BAG1R和正向引物BAG1F；所述BAG1R序列为，TCAACCTCTTCCTGTGGACTGTTC；所述BAG1F序列为，CACCGTTGTCAGCACTTGGAATA

(16)GSTM1引物对：包括反向引物GSTM1R和正向引物GSTM1F；所述GSTM1R序列为：CAGGCCCAGCTTGAATTTTT；所述GSTM1F序列为：CTCAAGCTATGAGGAAAAGAAGTACAC

(17)ACTB引物对：包括反向引物ACTBR和正向引物ACTBF；所述ACTBR序列为，GAAGCATTTGCGGTGGAC；所述ACTBF序列为：TTCCAGCAGATGTGGATCAGC

(18)GAPDH引物对：包括反向引物GAPDHR和正向引物GAPDHF；所述GAPDHR序列为，GTGATGGGATTTCCATTGATGA；所述GAPDHF序列为：ATGATTCCACCCATGGCAAA

(19)RPLPO引物对：包括反向引物RPLPOR和正向引物RPLPOF；所述RPLPOR序列为：TTTCAGCAAGTGGGAAGGTGTAA；所述RPLPOF序列为：ACCCCATTCTATCATCAACGGGTA

(20)GUS引物对：包括反向引物GUSR和正向引物GUSF；所述GUSR序列为，GACACGCAGGTGGTATCAGT；所述GUSF序列为，ATCCCCACTCAGTAGCCAAG

(21)TFRC引物对：包括反向引物TFRCR和正向引物TFRCF；所述TFRCR序列为：TAAACTCAGGCCCATTTCCT；所述TFRCF序列为：ACAGCCAACTGCTTTCATTT；

所述21条特异性taqman荧光探针的DNA序列分别如下：

(1)探针CCNB1-T序列为：ATGACTGTCTCCATTATTGATCGGTTCA；

(2)探针Ki-67-T序列为：CGGTGGTTCGACAAGTGGCCTTG；

(3)探针MYBL2-T序列为：AGGGAGGACAGACAATGCTGTGA；

(4)探针STK15-T：CTGTGGCACCCTGGACTACCTGC；

(5)探针SURV-T：TGAGAAGTGAGGGAGGAAGAAGGCAGT；

(6)探针Bcl2-T：TCCACGCCGAAGGACAGCGATG；

(7)探针CEGP1-T：GCTCGGAAGAGGGCCTGAGCTG；

(8)探针EstR1-T：TGCTGGAGATGCTGGACGC；

(9)探针PR-T：CTTACCTGTGGGAGCTGTAAGGTCTTCT；

(10)探针HER2-T：GCCCGAGTGTGCTATGGTCTGGGC；

(11)探针GRB7-T：GGCTCCCCACCCTTGAGAAGTGC；

(12)探针CTSL2-T：GTGGACTGTTCGCGTCCTCAAGGC；

(13)探针STMY3-T：CGGATCCTCCTGAAGCCCTTTTCGC；

(14)探针CD68-T：CCTCCAAGCCCAGATTCAGATTCGAGTC；

(15)探针BAG1-T：GATGGTTGCCGGGTCATGTTAATTGG；

(16)探针GSTM1-T：GACGCTCCTGATTATGACAGAAGCCAGTGG；

(17)探针ACTB-T：GAGTATGACGAGTCCGGCCCCTC；

(18)探针GAPDH-T：ACCGTCAAGGCTGAGAACGGGA；

(19)探针RPLPO-T：GAGTCCTGGCCTTGTCTGTGGAGAC；

(20)探针GUS-T：TTTGGAAAACAGCCTGTTTACTTGAGC；

(21)探针TFRC-T：GGATCTGAACCAATACAGAGCAGACATA；

所述各条探针的5’端有FAM修饰，3’端有BHQ-1修饰。