[发明专利]辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法

权利要求书

1.辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法，通过低剂量铯137放射性元素辐射后筛选获得，定名为：ycc Gy 1016；具体生产方法是通过下述步骤实现的：

1)选择目前生产中广泛使用的北虫草品种ycc-01作为辐射育种的出发菌株；

2)ycc-01培养基配方：葡萄糖20克、蛋白胨5克、酵母浸粉3克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、复合维生素100毫克及蒸馏水1000毫升，按常规方法生产液体种源；

3)按常规方法制备加富PDA培养基，其配方为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蛋白胨3g，酵母膏2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，水1000mL；取直径10厘米培养皿同步高压灭菌，倒平板、冷却后涂布稀释1000-3000倍的含有分生孢子的液体种源菌液0.1-0.5毫升，均匀涂布于平板上，在18-25℃避光定植培养24-36小时，然后转入辐射处理；

4)辐射源选择低剂量铯137，剂量50Gy-500Gy，距离30cm，照射2-300s，照射后在20℃暗培养2-7天，然后转入光照培养，光照强度4000-6000勒克斯，培养时间2-4天，然后根据菌落生长形态进行菌落筛选；

5)菌落筛选，在宏观层面，选择菌落生长正常，边缘整齐、菌丝不徒长，菌丝转色深的菌落；在微观层面通过显微镜进行观察，选择菌丝粗细均匀、细胞核数量多、菌丝分枝适度、分生孢子着生呈念珠状态，选择符合上述要求的菌落挑取保存；

6)将挑取菌落进行编号，按常规方法扩繁母种和液体菌种，并进行栽培，对出草正常，子实体形态正常、产量高的菌落制备液体菌种，培养基配方为：葡萄糖20克，蛋白胨5克，酵母浸粉3克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克，蒸馏水1000毫升，以出发菌株ycc-01为对照，常规培养后测定菌丝体中虫草素含量和液体培养基中虫草素含量；

7)经过检测，对虫草素含量高菌落进行提纯、复壮；按常规制备液体菌种，按每瓶鲜蚕蛹10个、干小麦20克、饮用水30毫升，灭菌后接种，按常规培养，待出草后选子实体形态好的，进行组织分离获取种源；

8)对选择出的产生虫草素高的组织分离种源进行遗传稳定性评价实验，最后筛选得到一株高产虫草素的新菌株，定名为：ycc Gy 1016新菌株。

2.根据权利要求1所述的辐射育种高产虫草素的北冬虫夏草种源的生产方法，其特征在于：所述遗传稳定性评价实验，指按如下步骤程序操作，至少连续栽培3个批次，来确认种源种性的稳定性；

1)采用马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，酵母膏2g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，水1000mL配方按常规繁育生产用液体菌种；

2)采用750毫升的玻璃罐头瓶为容器，每瓶45克小麦，加水70毫升，1.05公斤/平方厘米压力灭菌60分钟，冷却接种；

3)菌瓶先放于20℃避光培养6天，然后转入光暗交叉培养，每天白天以4000勒克斯强度光照，晚上暗培养，环境湿度85％，每天通风3次；

4)整个生产周期60天，子实体长度控制在8-12厘米，其它按常规操作，每批采用后抽样测定产量和虫草素含量。